Анализ нитрита и нитрата в биологических жидкостях с помощью методик, основанных на реакции Грисса: оценка применения реакции Грисса в исследованиях пути L-аргинин/оксид азота

Реакция Грисса, впервые описанная Иоганном Петером Гриссом в 1879 г. как метод определения нитрита (NO₂⁻), заключается в реакции нитрита в кислой среде с сульфаниловой кислотой (HO₃SC₆H₄NH₂) с образованием диазониевого катиона (HO₃SC₆H₄–N≡N⁺), который затем вступает в реакцию сочетания с ароматическим амином 1-нафтиламином (C₁₀H₇NH₂), образуя красно-фиолетовый водорастворимый азокраситель (HO₃SC₆H₄–NN–C₁₀H₆NH₂) с максимумом поглощения примерно при 540 нм. Первым аналитическим применением этой реакции диазотирования стало выявление нитрита в слюне в 1879 г. В течение столетия реакцию Грисса использовали исключительно для аналитического выявления бактериальной инфекции мочеполовых путей, то есть для определения нитрита, образующегося при бактериальном восстановлении нитрата (NO₃⁻) — основного аниона оксидов азота в моче человека. Однако после открытия в 1987 г. пути L-аргинин/оксид азота реакция Грисса стала наиболее часто используемым аналитическим методом количественного определения основных метаболитов оксида азота — нитрита и нитрата — в различных биологических жидкостях, прежде всего в крови и моче. Реакция Грисса специфична к нитриту. Для определения нитрата с помощью этой реакции необходимо предварительно химически или ферментативно восстановить нитрат до нитрита, после чего проводят реакцию диазотирования. Простота реакции Грисса, а также доступность и низкая стоимость анализа привлекли внимание исследователей из самых разных научных областей, изучающих сложный и трудный для исследования путь L-аргинин/оксид азота. В настоящее время известно множество методик, основанных на реакции Грисса. По сути, каждая лаборатория, работающая в этой области, использует собственную методику. Простейший вариант выполняют в серийном режиме, обычно по первоначально описанной Гриссом процедуре. После выявления многочисленных факторов, искажающих определение нитрита и нитрата в биологических жидкостях, а также в связи с необходимостью одновременного анализа этих анионов реакцию Грисса неоднократно модифицировали и автоматизировали. В последние годы реакцию Грисса сочетают с ВЭЖХ, используя её для постколоночной дериватизации хроматографически разделённых нитрита и нитрата. Такая система ВЭЖХ–Грисс доступна даже в готовом коммерческом виде. В настоящей статье представлен обзор доступных в настоящее время методик определения нитрита и нитрата в биологических жидкостях, основанных на реакции Грисса. Особое внимание уделено плазме крови и моче человека, количественным аспектам, а также специфическим аналитическим и преаналитическим факторам и проблемам, которые могут быть связаны с количественным определением нитрита и нитрата в этих биологических матрицах и влиять на его результаты. Дана оценка значения реакции Грисса для исследований пути L-аргинин/оксид азота.