Систематическая и комплексная стратегия снижения матричных эффектов при анализе методом LC/MS/MS

Разработана систематическая комплексная стратегия оптимизации пробоподготовки и хроматографии для минимизации матричных эффектов в биоаналитических методах LC/MS/MS. Сравнивали несколько методов пробоподготовки, включая осаждение белков (PPT), жидкостно-жидкостную экстракцию (LLE), твердофазную экстракцию (SPE) с использованием чисто катионообменного сорбента, обращённо-фазовую SPE и смешанную SPE. Изучали влияние pH подвижной фазы и продолжительности градиента на селективность и чувствительность при анализе компонентов матрицы и основных аналитов. Сравнивали матричные эффекты, общую чувствительность и разрешение при использовании сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии (UPLC) и высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC). Количество отдельных компонентов матрицы или их классов в экстрактах после пробоподготовки определяли методом LC/MS/MS с ионизацией электрораспылением (ESI), используя режим сканирования по ионам-предшественникам и мониторинг множественных реакций (MRM). PPT оказалась наименее эффективным методом пробоподготовки и часто приводила к выраженным матричным эффектам из-за присутствия большого количества остаточных компонентов матрицы. Обращённо-фазовая и чисто катионообменная SPE обеспечивали более чистые экстракты и уменьшали матричные эффекты по сравнению с PPT. Однако наиболее чистые экстракты получали при использовании полимерной смешанной SPE, сочетающей механизмы удерживания в обращённой фазе и ионного обмена. Такие смешанные сорбенты значительно снижали содержание остаточных компонентов матрицы в биологических образцах, что приводило к выраженному уменьшению матричных эффектов. LLE также обеспечивала получение чистых конечных экстрактов, однако извлечение аналитов, особенно полярных, было очень низким. Изменение pH подвижной фазы позволяло варьировать удерживание основных соединений относительно фосфолипидов, удерживание которых, как правило, относительно не зависит от pH. Помимо ожидаемых преимуществ UPLC в отношении разрешения, скорости и чувствительности, парный t-критерий показал статистически значимое уменьшение матричных эффектов по сравнению с традиционной HPLC. Сочетание полимерной смешанной SPE, оптимального pH подвижной фазы и UPLC обеспечивает существенные преимущества в снижении матричных эффектов, обусловленных компонентами плазмы, а также повышении устойчивости и чувствительности биоаналитических методов.