Стволовые клетки жировой ткани: лучше ли они, чем МСК костного мозга?

Для дальнейшего изучения пролиферативного потенциала и способности к дифференцировке стволовых клеток жировой ткани (ADSC) клетки выделяли усовершенствованными методами, а кривые роста строили с помощью теста CCK-8. Фенотип клеток определяли методом проточной цитометрии по экспрессии поверхностных белков. Способность ADSC дифференцироваться по нескольким направлениям оценивали с помощью индукторов адипогенной, хондрогенной, остеогенной и миогенной дифференцировки. Из 400–600 мг жировой ткани удавалось получить около 5 × 10⁵ стволовых клеток. ADSC можно было непрерывно культивировать in vitro до 1 месяца без пассирования; за это время наблюдалось несколько фаз логарифмического роста. По данным проточной цитометрии, ADSC экспрессировали высокие уровни маркеров стволовых клеток (CD13, CD29, CD44, CD105 и CD166), но не экспрессировали маркеры гемопоэтических клеток CD34 и CD45; экспрессия антигена HLA-DR также отсутствовала. Кроме того, в ADSC выявляли экспрессию связанных со стволовыми клетками факторов транскрипции Nanog, Oct-4, Sox-2 и Rex-1. На раннем этапе остеогенной индукции обнаруживали щелочную фосфатазу (ALP), а при окрашивании по фон Косса — кальцифицированные узелки. Внутриклеточные липидные капли выявляли окрашиванием красителем Oil Red. Дифференцированные кардиомиоциты обнаруживали методом флуоресцентного окрашивания на коннексин 43. Для получения большего количества стволовых клеток ADSC можно пересевать каждые 14 дней вместо стандартных 5 дней. После 25 пассажей ADSC сохраняли высокую пролиферативную активность, фенотип и способность дифференцироваться по нескольким направлениям.