Определение анаболических веществ в биологически активных добавках с помощью жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии высокого разрешения

Разработан и валидирован чувствительный метод идентификации и количественного определения следовых количеств анаболических стероидов и кленбутерола в биологически активных добавках с помощью жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии высокого разрешения (LC-HRMS) в режиме химической ионизации при атмосферном давлении (APCI). Использовали одноступенчатый масс-анализатор Orbitrap с разрешением 100 000 (полная ширина пика на половине его высоты, FWHM). К 1 г добавки добавляли тестостерон-d3 в качестве внутреннего стандарта, пробу растворяли в метаноле, выпаривали досуха, разбавляли раствором гидроксида натрия и экстрагировали смесью пентана и диэтилового эфира в соотношении 9:1. Экстракт непосредственно вводили в систему LC-HRMS. Метод прошёл полную валидацию. Пределы обнаружения анаболических андрогенных стероидов составляли 1–25 нг/г, предел количественного определения для всех анализируемых веществ — 50 нг/г. Для всех соединений калибровочная зависимость была линейной в диапазоне от предела количественного определения до 2000 нг/г; коэффициенты корреляции во всех случаях превышали 0,99. Точность (в %E) и повторяемость (%CV) во всех случаях составляли менее 15%. Получены хорошие показатели матричного эффекта и степени извлечения. Простая пробоподготовка и короткое время анализа — всего 16 мин — обеспечивали быстрое выявление анализируемых веществ. Метод применили для анализа 30 биологически активных добавок на наличие не указанных на маркировке анаболических веществ. В одном образце нередко обнаруживали несколько анаболических андрогенных стероидов: андростендион выявили в девяти добавках, 5-андростен-3β-ол-17-он (ДГЭА) — в 12, метандиенон — в трёх, станозолол — в одной, тестостерон — в семи, эфиры тестостерона — в четырёх. Полные спектры, полученные методом HRMS, также позволяли ретроспективно анализировать соединения, не включённые в исходный перечень на начальном этапе разработки метода.