Последующая переработка, разработка лекарственной формы и оценка антитромботической активности наттокиназы микробного происхождения

В работе описаны процессы выделения и очистки наттокиназы (NK), продуцируемой Bacillus subtilis при твердофазной ферментации, а также роль эффективной пероральной лекарственной формы очищенной NK в лечении тромботических расстройств. Молекулярная масса очищенной NK составила 28 кДа, удельная активность — 504,4 FU/мг. Для пероральной доставки этого фермента были разработаны кислотоустойчивые хитозановые наночастицы, нагруженные наттокиназой (sNLCN). Для изучения и валидации влияния технологических (независимых) переменных на показатели качества (зависимые переменные) наночастиц использовали план Бокса—Бенкена. Целостность, конформационную стабильность и сохранность фибринолитической активности NK — как в свободной форме, так и в составе sNLCN — оценивали с помощью электрофореза SDS-PAGE, CD-анализа и исследования лизиса сгустка in vitro соответственно. В модели тромбоза хвоста пероральное введение sNLCN крысам Вистар приводило к значимому снижению частоты тромбозов по сравнению с отрицательным контролем и группой, получавшей свободную NK. Кроме того, анализ коагуляции, включавший определение протромбинового времени и активированного частичного тромбопластинового времени, показал, что sNLCN обладали значительно более выраженным антитромботическим потенциалом по сравнению со свободной NK (p < 0,001). При этом антитромботический профиль sNLCN был сходен с профилем варфарина. Полученные результаты свидетельствуют о перспективности применения sNLCN для пероральной доставки NK при лечении тромботических расстройств.