Препарат тонких срезов для регистрации методом patch-clamp нейронов центральной нервной системы млекопитающих

(1) Описан препарат, позволяющий регистрировать активность нейронов центральной нервной системы (ЦНС) млекопитающих in situ методом patch-clamp. (2) С помощью вибрационного микротома готовили тонкие срезы, в которых можно было визуально идентифицировать отдельные нейроны. Локальная очистка тел клеток физиологическим раствором обнажала мембрану и позволяла сформировать высокоомное уплотнение между мембраной и пипеткой для patch-clamp. (3) С помощью различных конфигураций метода patch-clamp регистрировали мембранный потенциал, токи целой клетки и токи одиночных каналов в нейронах и изолированных участках мембраны. (4) Метод patch-clamp применяли для регистрации нейронов, заполненных флуоресцентными красителями. Окрашивание проводили, заполняя клетки во время регистрации или используя предварительное ретроградное мечение. (5) Показано, что подготовка тонких срезов и метод patch-clamp применимы к спинному мозгу и практически любой области головного мозга, а также к разным видам животных. Эти методы подходят и для животных разного постнатального возраста — от новорождённых до взрослых.