Одностадийная очистка полипептидов, экспрессируемых в Escherichia coli в виде гибридов с глутатион-S-трансферазой

Созданы плазмидные экспрессионные векторы, обеспечивающие синтез чужеродных полипептидов в Escherichia coli в виде гибридов с С-концом Sj26 — глутатион-S-трансферазы (GST; EC 2.5.1.18) массой 26 кДа, кодируемой паразитическим гельминтом Schistosoma japonicum. В большинстве случаев гибридные белки растворимы в воде и могут быть очищены из неочищенных бактериальных лизатов в неденатурирующих условиях методом аффинной хроматографии на иммобилизованном глутатионе. При использовании периодической промывки несколько гибридных белков можно параллельно очистить менее чем за 2 ч с выходом до 15 мкг белка на 1 мл культуры. Векторы сконструированы таким образом, чтобы носитель GST можно было отделить от гибридных белков расщеплением сайт-специфическими протеазами, например тромбином или фактором Xa свертывания крови; после этого носитель и любой нерасщеплённый гибридный белок удаляют сорбцией на глутатино-агарозе. Эта система успешно применена для экспрессии и очистки более 30 различных эукариотических полипептидов.