Выявление антагонистов ванилоидного канала транзиторного рецепторного потенциала 3 (TRPV3) из Achillea alpina L. и их разделение методом жидкость–жидкостной очистительной экстракции и высокоскоростной противоточной хроматографии

С помощью флуоресцентного анализа кальция и фракционирования этанольного экстракта травы Achillea alpina L. под контролем биологической активности были выделены изохлорогеновые кислоты A и B — антагонисты канала транзиторного рецепторного потенциала ванилоидного типа 3 (TRPV3). Структуры соединений установлены методом спектроскопического анализа, а их ингибирующая активность подтверждена методом регистрации токов в конфигурации «целая клетка» на клетках почки эмбриона человека HEK293, экспрессирующих человеческий TRPV3. Согласно результатам молекулярного докинга, оба соединения связываются с одним и тем же активным карманом белка канала человеческого TRPV3 и имеют более низкую энергию связывания, чем агонист 2-аминоэтоксидифенилборат (2-APB). Для разделения изохлорогеновых кислот A и B из травы Achillea alpina L. успешно разработан метод высокоскоростной противоточной хроматографии (HSCCC) в сочетании с жидкость–жидкостной экстракцией. Для удаления примесей высокой и низкой полярности из смеси были выбраны этилацетат и система н-гексан — этилацетат — вода (3:3:4 и 1:5:4, об./об./об.) в качестве экстракционных систем. После распределения растворителей из 60 г этанольного экстракта получили 1,7 г обогащённой фракции. Последующее разделение 480 мг этой фракции методом HSCCC с использованием системы н-гексан — этилацетат — вода, содержащей 1% уксусной кислоты (1:4:8, об./об./об.), позволило получить 52,5 мг изохлорогеновой кислоты B (чистота 98,3%) и 37,6 мг изохлорогеновой кислоты A (чистота 96,2%).