Визуализация сосудистой сети сосудистой оболочки и сетчатки мыши с помощью перфузии флуоресцентно меченным лектином томата

Цель: Разработать надёжный и простой метод оценки сосудистой сети сосудистой оболочки и сетчатки мышей на препаратах целиком и поперечных срезах с использованием лектина томата (TL; Lycopersicon esculentum).

Методы: Альбиносным мышам (n = 27) внутрисосудисто вводили лектин томата в концентрации 1 мг/мл, конъюгированный с DyLight-594, через хвостовую или яремную вену либо в левый желудочек сердца. Препараты сетчатки и сосудистой оболочки целиком исследовали с помощью флуоресцентной микроскопии. Для сравнения с маркировкой лектином томата проводили перфузию GSL-IB4, конъюгированным с DyLight-594, и флуоресцеинизотиоцианатом. На поперечных срезах выполняли двойную маркировку эндотелиальных клеток сосудистой оболочки: перфузионным лектином томата и антителами к CA4 — маркеру эндотелиальных клеток, специфичному для хориокапилляров. Долю перфузируемых сосудов сосудистой оболочки и сетчатки оценивали полуколичественным методом. Одной мыши перед перфузией выполнили термическое лазерное повреждение для абляции сосудов сетчатки и сосудистой оболочки.

Результаты: Внутрисосудистое введение лектина томата обеспечивало стабильную и выраженную маркировку стенок сосудов сетчатки и сосудистой оболочки. На поперечных срезах хориокапилляры одновременно маркировались CA4 и лектином томата. На плоских препаратах после введения лектина томата через хвостовую или яремную вену сосуды сосудистой оболочки маркировались лучше, чем после внутрисердечной перфузии (p < 0,01). Лектин томата обеспечивал более стабильную маркировку сосудистого русла сетчатки и сосудистой оболочки, чем GSL-IB4. Метод позволял легко выявлять повреждение сосудов после лазерной абляции.

Выводы: Внутрисосудистое введение лектина томата позволяет быстро, просто и надёжно маркировать нормальные и подвергнутые абляции сосуды сетчатки и сосудистой оболочки мышей.

Трансляционная значимость: Полученные данные помогут в моделировании у грызунов таких заболеваний, как возрастная макулярная дегенерация и сахарный диабет, а также других ишемических и ангиогенных процессов; эти модели можно использовать для оценки эффективности лечения.