Высокочувствительное и высокоспецифичное выявление стафилококковых энтеротоксинов SEA, SEG, SEH и SEI методом иммуноанализа

Стафилококковое пищевое отравление (SFP) — одно из наиболее распространённых пищевых заболеваний в мире, возникающее после употребления стафилококковых энтеротоксинов (SE), прежде всего энтеротоксина стафилококка типа A (SEA), который продуцируется в пищевых продуктах энтеротоксигенными штаммами стафилококков, главным образом S. aureus. Поскольку было показано, что недавно выявленные стафилококковые энтеротоксины обладают эметогенными свойствами, а кодирующие их гены обнаруживаются в пищевых продуктах, связанных со вспышками отравлений, необходимы надёжные методы подтверждения присутствия самих токсинов. Это позволит уточнить роль этих нетипичных стафилококковых энтеротоксинов и точно документировать вспышки SFP. Мы получили и охарактеризовали моноклональные антитела, специфичные к энтеротоксинам стафилококка типов G, H и I (соответственно SEG, SEH и SEI), а также к SEA. С их помощью для каждой из этих четырёх мишеней разработаны высокочувствительные, специфичные и надёжные трёхчасовые сэндвич-иммуноферментные анализы. Мы оценили их пригодность для выявления энтеротоксинов в различных матрицах — бактериальных культурах, загрязнённых пищевых продуктах и образцах человека — и для разных целей: характеристики штаммов, контроля безопасности пищевых продуктов, выявления биологических угроз и диагностики. Кроме того, мы впервые начали разработку и описали моноплексные и квинтуплексные иммунохроматографические тесты для выявления этих новых стафилококковых энтеротоксинов; квинтуплексный тест предназначен для одновременного определения SEA, энтеротоксина стафилококка типа B (SEB), SEG, SEH и SEI. Пределы обнаружения в буферном растворе составляли менее 10 пг/мл (0,4 пМ) для иммуноферментных анализов и не менее 300 пг/мл (11 пМ) для иммунохроматографии для всех целевых токсинов; перекрёстной реактивности не наблюдалось. Исследования с внесением токсинов и/или анализ супернатантов бактериальных культур подтвердили применимость разработанных методов, которые могут стать надёжными инструментами для рутинного выявления SEG, SEH и SEI.