Возможности и проблемы специфического выделения внеклеточных везикул из гетерогенных популяций

Внеклеточные везикулы (ВВ) привлекают внимание благодаря возможности получать диагностическую информацию из образцов жидкостной биопсии. Клетки постоянно выделяют везикулы, различающиеся размером, содержимым и свойствами в зависимости от биогенеза, происхождения и функции. Такая гетерогенность усложняет выделение и характеристику ВВ, что привело к разработке различных протоколов. Высокое содержание ВВ во всех биологических жидкостях и наличие в них стабильных биомаркеров, зависящих от происхождения, делают ВВ перспективным инструментом поиска биомаркеров и диагностики. Однако применение ВВ ограничено недостаточной характеристикой качества образцов. В настоящей работе сравнивали часто используемые методы выделения: ультрацентрифугирование, центрифугирование в градиенте плотности, ультрафильтрацию и хроматографию с исключением по размеру. Затем с помощью иммуномагнитных частиц пытались специфично выделить ВВ предстательной железы из супернатантов клеточных культур. Качество и количество ВВ оценивали методом анализа траекторий наночастиц, вестерн-блоттинга и электронной микроскопии. Кроме того, для характеристики субпопуляций ВВ разработали микромассив антител с точечным нанесением. В настоящем исследовании на одном микромассиве анализировали 16 образцов по 6 различным поверхностным маркерам ВВ в трёх повторностях. Метод легко масштабируется, что позволяет быстрее и экономичнее характеризовать образцы.