Разделение энантиомеров и количественное определение двух гомологичных β-аминокислот, обнаруженных в растениях семейства Бобовые

Непротеиногенные аминокислоты — важные метаболиты растений семейства Бобовые, обладающие ценными биологическими свойствами наряду с токсичностью. Ранее мы впервые выявили две непротеиногенные аминокислоты — гомопролин и гомопипеколовую кислоту — у представителей рода Ononis. В настоящем исследовании изучение было расширено на другие виды семейства Бобовые (O. spinosa, O. arvensis, M. sativa, A. vulneraria), используемые в медицине, пищевой промышленности и косметологии. Поскольку энантиомеры этих β-аминокислот могут различаться по биологической активности и токсичности, целью работы была разработка метода хирального разделения энантиомеров гомопролина и гомопипеколовой кислоты и его применение к образцам растений. Для этого были получены дансилированные производные, а также разработаны капиллярный электрофорез с модификацией циклодекстринами и метод хиральной ВЭЖХ. Хотя базовое разделение было достигнуто методом капиллярного электрофореза с использованием моно-(6-N-пирролидин-6-дезокси)-β-CD, моно-(6-N-пиперидин-6-дезокси)-β-CD или сульфатированной γ-циклодекстриновой фазы при pH 6,0, для анализа образцов растений более подходящим оказался метод ВЭЖХ. В образцах растений наличие и гомопролина, и гомопипеколовой кислоты было подтверждено в виде рацематов. Кроме того, определяли содержание гомопролина и гомопипеколовой кислоты в нескольких видах семейства Бобовые. Поскольку эти соединения могут присутствовать в растениях в форме эфиров, методику пробоподготовки оптимизировали для высвобождения целевых молекул. Для очистки образцов испытали несколько вариантов твердофазной экстракции; разработан и валидирован метод ВЭЖХ-МС/МС с использованием неподвижной фазы C8. Наличие гомопролина и гомопипеколовой кислоты было подтверждено у всех изученных видов; содержание гомопипеколовой кислоты составляло от 1 до 500 мкг/г, а гомопролина — от 6 до 60 мкг/г. Между видами растений, географическими регионами происхождения и ботаническими частями выявлены значимые различия. В целом наиболее богатыми источниками обеих аминокислот оказались образцы корней O. spinosa, однако между видами отмечалась высокая вариабельность.