Определение кломифена в кератиновых матрицах (волосах и ногтях)

Кломифен — селективный модулятор эстрогеновых рецепторов, применяемый для лечения бесплодия у женщин при нарушении овуляции. В спорте его применение спортсменами запрещено в любое время; Всемирное антидопинговое агентство относит его к разделу S4.2 «Гормональные и метаболические модуляторы». Кломифен может опосредованно повышать уровень тестостерона в организме и уменьшать некоторые побочные эффекты злоупотребления синтетическими стероидами. Несмотря на то что препарат назначают миллионам людей, ранее о его обнаружении в волосах или срезах ногтей не сообщалось. Целью исследования была разработка специфического метода выявления кломифена в волосах и срезах ногтей методом тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией и квадрупольным анализатором. Затем метод применили в случае оспаривания результата допинг-анализа. Образец массой 30 мг измельчённого материала в течение 1 ч обрабатывали ультразвуком и инкубировали в 1 мл метанола в присутствии 2 нг диазепама-d5, использованного в качестве внутреннего стандарта. Хроматографическое разделение проводили на колонке HSS C18 с градиентным элюированием в течение 15 мин. После добавления кломифена в соответствующих количествах к контрольным образцам волос и ногтей линейность метода была подтверждена в диапазоне от 1 до 500 пг/мг (r² = 0,9994 для волос и 0,9995 для ногтей). Предел обнаружения для обеих матриц составил 0,3 пг/мг. Помех со стороны эндогенных соединений, в частности стероидов, не выявлено. В лобковых волосах и срезах ногтей с пальцев рук спортсмена, оспаривавшего неблагоприятный результат допинг-анализа, обнаружили кломифен в концентрациях 85 и 20 пг/мг соответственно.