Электрофоретический перенос белков из полиакриламидных гелей на нитроцеллюлозные листы: методика и некоторые области применения

Разработан метод электрофоретического переноса белков из полиакриламидных гелей на нитроцеллюлозные листы. Метод обеспечивает количественный перенос рибосомных белков из гелей, содержащих мочевину; для гелей с додецилсульфатом натрия сохранялся исходный характер полос без потери разрешения, однако перенос не был количественным. Метод позволяет выявлять белки авторадиографией и проще традиционных процедур. Иммобилизованные белки выявлялись иммунологическими методами. Все дополнительные участки связывания на нитроцеллюлозе блокировали избытком белка; затем связывали специфические антитела и, наконец, вторые антитела против первых. Вторые антитела были либо мечены радиоактивно, либо конъюгированы с флуоресцеином или пероксидазой. Затем специфический белок выявляли соответственно авторадиографией, под УФ-светом или по продукту пероксидазной реакции. В последнем случае четко выявлялось всего 100 пг белка. Предполагается, что метод будет применим для анализа широкого спектра белков со специфическими реакциями или лигандами.