Моноклональные антитела в патогенезе гепарин-индуцированной тромбоцитопении

Введение: Гепарин-индуцированная тромбоцитопения (ГИТ) — это иммунно-опосредованное нарушение тромбоцитов, вызванное антителами, которые связываются с комплексами тромбоцитарного фактора 4 (PF4) и гепарина. ГИТ характеризовали как поликлональный иммунный ответ; однако при изучении других редких анти-PF4-ассоциированных заболеваний были выявлены антитела с клонически ограниченным происхождением.

Методы: В этом исследовании мы изучали клональность патогенных антител при ГИТ. Антитела к комплексу PF4-гепарин выделяли аффинной очисткой с использованием PF4-гепариновых шариков из образцов сыворотки, полученных от девяти пациентов с клинически и серологически подтвержденной ГИТ. Клональность антител оценивали методом иммунофиксационного электрофореза и масс-спектрометрии. Связывание антител с PF4 оценивали с помощью иммуноферментного анализа, а функциональную активацию тромбоцитов — с использованием теста экспрессии P-селектина. Эпитопы антител при ГИТ картировали у двух пациентов с использованием библиотеки мутантов PF4.

Результаты: Образцы сыворотки всех девяти пациентов с ГИТ были положительными на антитела к PF4-гепарину, активирующие тромбоциты, как по данным иммуноферментного анализа, так и по результатам теста экспрессии P-селектина, а в шести образцах (67%) методом иммунофиксационного электрофореза выявляли моноклональное антитело. Аффинно очищенные антитела к PF4-гепарину из всех девяти образцов активировали тромбоциты в тесте экспрессии P-селектина, а масс-спектрометрия показала моноклональность. После аффинной очистки образцы сыворотки, из которых были удалены антитела, утратили способность связываться в иммуноферментном анализе и утратили функциональную активность в тесте экспрессии P-селектина, что подтвердило удаление патогенных антител. Эпитопы на PF4, на которые были направлены анти-PF4-гепариновые антитела из сывороточных образцов, совпадали с эпитопами, распознаваемыми аффинно очищенными моноклональными антителами.

Выводы: Патогенные антитела у всех девяти пациентов с ГИТ оказались моноклональными. Это позволяет лучше понять патогенез ГИТ и имеет значение для совершенствования диагностики и разработки таргетной терапии. (Исследование финансировалось Канадскими институтами исследований в области здравоохранения и Национальными институтами здравоохранения.).