Циклоспорин A уменьшает воспаление при болезни сухого глаза, подавляя сигнальный путь cGAS–STING за счёт активации аутофагии

Цель: Изучить роль аутофагии и сигнального пути циклической GMP-AMP-синтазы (cGAS) — стимулятора генов интерферона (STING), а также механизмы их регуляции при воспалении на фоне болезни сухого глаза (БСГ). Кроме того, исследовать, каким образом циклоспорин A (CsA) ослабляет воспалительную реакцию при БСГ, воздействуя на аутофагию и путь cGAS–STING.

Методы: Для изучения влияния CsA на аутофагию и путь cGAS–STING использовали две модели болезни сухого глаза: клетки эпителия роговицы человека HCE-T, подвергнутые воздействию гипертонической среды, и мышей линии C57BL/6, получавших бензалкония хлорид (BAC). Уровни лёгкой цепи 3 (LC3), P62, γ-H2AX, cGAS и STING определяли методом иммуноблоттинга. Изменения уровней мРНК IL-6 и IL-1β после введения препаратов оценивали методом количественной ПЦР с обратной транскрипцией; аутофагосомы исследовали с помощью электронной микроскопии. Для уточнения влияния аутофагии на путь cGAS–STING применяли ингибитор аутофагии 3-метиладенин (3-MA). Признаки болезни сухого глаза у мышей оценивали с помощью окрашивания гематоксилином и эозином и флюоресцеинового окрашивания роговицы.

Результаты: В клетках HCE-T, подвергнутых воздействию гипертонической среды, и в модели болезни сухого глаза, вызванной BAC, наблюдалась выраженная активация аутофагии и пути cGAS–STING. CsA активировал аутофагию и снижал уровни γ-H2AX, cGAS, STING, IL-6 и IL-1β в моделях болезни сухого глаза. Ингибитор аутофагии 3-MA устранял подавляющее действие CsA на путь cGAS–STING и воспалительную реакцию. Эксперименты in vivo также показали, что CsA активировал аутофагию, подавлял экспрессию компонентов пути cGAS–STING, способствовал восстановлению морфологии эпителиальных клеток роговицы и снижал показатели флюоресцеинового окрашивания роговицы у мышей с болезнью сухого глаза.

Выводы: CsA активировал аутофагию и тем самым подавлял путь cGAS–STING, что уменьшало воспаление в моделях болезни сухого глаза и выраженность её признаков у мышей.