Функциональная оценка конститутивно активирующего варианта CASR, вызывающего аутосомно-доминантную гипокальциемию

Введение: Редкой причиной гипокальциемии является аутосомно-доминантная гипокальциемия 1-го типа (ADH1), обусловленная вариантом с усилением функции гена рецептора, чувствительного к кальцию (CASR).

Цель: У трёх пациентов из двух неродственных семей с гипокальциемией и другими биохимическими показателями, соответствующими ADH1, провели поиск вариантов CASR и их функциональную оценку для подтверждения диагноза.

Методы: Секвенирование кодирующей области CASR методом Сэнгера у трёх пациентов выявило единственный вариант. Его получили методом сайт-направленного мутагенеза и ввели в состав FLAG-меченой конструкции вектора экспрессии pcDNA3.1 для клеток млекопитающих. Экспрессию варианта в клетках HEK293 сравнивали с экспрессией FLAG-меченого рецептора дикого типа методом вестерн-блоттинга. Активность оценивали после воздействия различных концентраций кальция с помощью иммуноферментного анализа IP-One.

Результаты: Анализ последовательности выявил у всех трёх пациентов гетерозиготный миссенс-вариант CASR: замену аденина на гуанин в положении 1256, приводящую к замене аспарагина на серин в положении 419 (N419S) в домене Venus flytrap рецептора CaSR. Экспрессия варианта была немного выше, чем экспрессия рецептора дикого типа. Важно, что анализ IP-One продемонстрировал конститутивную активность варианта в отсутствие ионов кальция; усиление функции сохранялось и при физиологически значимых концентрациях кальция.

Выводы: Вариант N419S, выявленный у пациентов из двух отдельных семей, обладает конститутивной активностью и является причиной ADH1. Это первое описание конститутивно активирующего варианта внеклеточного домена CaSR.