Трансформация интактных клеток дрожжей, обработанных катионами щелочных металлов

Интактные клетки дрожжей, обработанные катионами щелочных металлов, поглощали плазмидную ДНК. К индукции компетентности были эффективны Li+, Cs+, Rb+, K+ и Na+. Условия трансформации Saccharomyces cerevisiae D13-1A плазмидой YRp7 были подробно изучены с использованием CsCl. Оптимальное время инкубации составило 1 ч, а оптимальная концентрация клеток — 5 x 10(7) клеток/мл. Оптимальная концентрация Cs+ составляла 1,0 М. Эффективность трансформации повышалась по мере увеличения концентрации плазмидной ДНК. Полиэтиленгликоль был абсолютно необходим. Тепловой импульс и различные полиамины или основные белки стимулировали поглощение плазмидной ДНК. Помимо кольцевой ДНК, клетки дрожжей, обработанные Cs+, поглощали и линейную плазмидную ДНК, хотя эффективность ее захвата существенно снижалась. Эффективность трансформации с использованием Cs+ или Li+ была сопоставима с таковой при традиционных методах с протопластами для плазмиды, содержащей ars1, но не для плазмид, содержащих origin репликации 2 микрон.