Выявление полиморфизмов гена сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF): корреляция с вариабельностью продукции белка VEGF

Нарушенная экспрессия сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) рассматривается как один из основных факторов развития ряда распространённых заболеваний. Целью исследования было оценить степень генетической вариабельности гена VEGF и определить, влияет ли эта вариабельность на уровень экспрессии белка VEGF. Промоторную область и экзон 1 гена VEGF скринировали на полиморфизмы с помощью анализа полиморфизма конформации одноцепочечной ДНК (SSCP) и прямого секвенирования ПЦР-продуктов. Мы выявили 15 новых последовательностных полиморфизмов, большинство из которых были редкими. Из них 11 полиморфизмов представляли собой одиночные замены оснований, 3 — одиночные вставки основания и 1 — делецию двух оснований. Тринадцать полиморфизмов располагались в промоторе и 2 — в 5'-нетранслируемой области гена (5'UTR). Для 10 полиморфизмов были разработаны системы типирования методом ПЦР с анализом длины рестрикционных фрагментов (ПЦР-RFLP). Для двух распространённых полиморфизмов в позициях -460 и +405 была разработана комбинированная система типирования методом ПЦР со специфическими праймерами (SSP-PCR), позволяющая определить цис-/транс-ориентацию каждого аллеля и, следовательно, установить гаплотипы. Выявлена значимая корреляция между продукцией белка VEGF мононуклеарными клетками периферической крови (PBMC), стимулированными липополисахаридом (LPS), и генотипом по полиморфизму +405.