Скрининг анаболических стероидов в моче лошадей методом жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией

Анаболические стероиды способны повышать спортивные результаты и относятся к запрещённым веществам на Олимпийских играх, а также в скачках и конных соревнованиях. Контроль их применения у скаковых лошадей традиционно проводят путём выявления анаболических стероидов и/или их метаболитов в образцах мочи методом газовой хроматографии с масс-спектрометрией (ГХ–МС). Однако такой подход обычно требует трудоёмкой пробоподготовки и химической дериватизации и может быть недостаточно чувствительным при выявлении некоторых стероидов. В настоящей работе описан метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ–МС/МС) для выявления анаболических стероидов, анализ которых методом ГХ–МС недостаточно эффективен. Обработанную ферментами мочу подвергали твердофазной экстракции с использованием картриджа Bond Elut Certify, после чего для дополнительной очистки проводили щелочную промывку. Разделение стероидов выполняли на обращённо-фазной колонке DB-8 с использованием 0,1% уксусной кислоты и метанола в качестве подвижной фазы в градиентном режиме элюирования. Для выявления стероидов масс-спектрометр работал в режиме положительной электроспрей-ионизации (ESI) с мониторингом множественных реакций (MRM). В образцах мочи, искусственно обогащённых 15 анаболическими стероидами — андростадиеноном, 1-андростендионом, боластероном, болдионом, 4-эстрендионом, гестриноном, метандростенолоном, метенолоном, 17α-метилтестостероном, норболетоном, норметандролоном, оксандролоном, стенболоном, тренболоном и туринаболом, — стабильно выявлялись низкие концентрации этих соединений, выраженные в нг/мл. В образцах чистой мочи в моменты удерживания целевых ионов значимых матричных помех не обнаружено. Были оценены специфичность, чувствительность и прецизионность метода, степень извлечения, а также эффективность этапа ферментативного гидролиза. Успешное применение метода для анализа образцов мочи после введения ацетата метенолона показало, что он может эффективно выявлять анаболические стероиды и их метаболиты в моче лошадей.