Анализ апоптоза в лейкоцитах человека, индуцированного циклогексимидом: флуоресцентная микроскопия с окрашиванием аннексином V и йодидом пропидия в сравнении с акридиновым оранжевым и этидием бромидом

Апоптоз — строго регулируемый запрограммированный процесс гибели клеток, сопровождающийся многочисленными изменениями. Поскольку апоптоз участвует во многих патологических и физиологических процессах, для выявления гибели клеток необходимы надёжные методы. В этом исследовании мы сравнили несколько методов выявления апоптоза и некроза в лейкоцитах человека. Апоптоз индуцировали инкубацией клеток с различными дозами циклогексимида (CHX) или облучением УФ-В с длиной волны 312 нм. Для выявления апоптоза применяли световую микроскопию (окрашивание по Май—Грюнвальду—Гимзе и трипановым синим), флуоресцентную микроскопию (окрашивание акридиновым оранжевым/этидием бромидом и аннексином V/йодидом пропидия), а также электрофорез фрагментированной геномной ДНК в агарозном геле. Циклогексимид индуцировал апоптоз в культивируемых мононуклеарных клетках периферической крови, но не влиял на апоптоз в полиморфноядерных клетках; следовательно, его действие зависит от типа клеток. Оценка и сравнение методов выявления апоптоза показали следующее. На цитоспиновом препарате, окрашенном по Гимзе, можно распознать основные морфологические признаки некротической и апоптотической гибели. Окрашивание трипановым синим, широко применяемое для оценки жизнеспособности клеток, не подходит для выявления апоптоза. Оба метода флуоресцентной микроскопии давали надёжные и воспроизводимые результаты, чётко разграничивали субпопуляции апоптотических клеток и тесно коррелировали между собой. Электрофорез выделенной ДНК в агарозном геле применим к широкому спектру типов клеток, однако его нельзя использовать для всех типов клеток и при любых условиях индукции апоптоза. В целом микроскопию клеток, окрашенных акридиновым оранжевым и этидием бромидом, можно рекомендовать как наиболее надёжный из изученных методов.