Как интерпретировать результаты иммуноблоттинга LC3

Белок LC3 (легкая цепь 3 белка, ассоциированного с микротрубочками) широко используют для мониторинга аутофагии. Один из подходов заключается в выявлении превращения LC3-I в LC3-II методом иммуноблоттинга, поскольку количество LC3-II напрямую связано с числом аутофагосом. Однако сам LC3-II разрушается в процессе аутофагии, что затрудняет интерпретацию результатов иммуноблоттинга LC3. Кроме того, количество LC3 в определённый момент времени не отражает аутофагический поток. Поэтому важно оценивать количество LC3-II, доставленного в лизосомы, сравнивая его уровень в присутствии и в отсутствие ингибиторов лизосомных протеаз. Ещё одна проблема этого метода заключается в том, что LC3-II при иммуноблоттинге выявляется значительно чувствительнее, чем LC3-I. Поэтому простое сравнение LC3-I и LC3-II или их суммирование для расчёта соотношения может быть некорректным; предпочтительно сравнивать количество LC3-II в разных образцах.