Определение отношений ¹³C/¹²C в эндогенных стероидах мочи: валидация метода, референсная популяция и применение в допинг-контроле

Представлен комплексный метод определения стабильных изотопов углерода в эндогенных стероидах мочи с помощью газовой хроматографии, сжигания и масс-спектрометрии с измерением изотопных отношений (GC/C/IRMS). Ключевой этап подготовки образца — последовательная очистка методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) недериватизированных и ацетилированных стероидов, позволяющая выделить из одного образца мочи десять аналитов: 11β-гидроксиандростерон, 5α-андрост-16-ен-3β-ол, прегнандиол, андростерон, этиохоланолон, тестостерон, эпитестостерон, 5α-андростан-3α,17β-диол, 5β-андростан-3α,17β-диол и дегидроэпиандростерон. Эти стероиды особенно важны для допинг-контроля, поскольку позволяют с высокой чувствительностью выявлять злоупотребление стероидами спортсменами, в том числе ретроспективно. В зависимости от биологических особенностей организма предел определения для всех стероидов составляет 5–10 нг/мл при объёме образца 10 мл. Метод валидировали с помощью линейных моделей смешения для каждого стероида, оценивая повторяемость и воспроизводимость. Специфичность каждого аналита дополнительно подтверждена методом газовой хроматографии — масс-спектрометрии (GC/MS); влияния подготовки образца и количества аналита на отношения изотопов углерода не выявлено. Для определения естественных отношений ¹³C/¹²C всех исследуемых стероидов измерили показатели у референсной популяции из 61 человека (n = 61), что позволило рассчитать референсные пределы для всех значимых значений Δ стероидов.