Рекомендации по диагностике и мониторингу пароксизмальной ночной гемоглобинурии и связанных с ней заболеваний методом проточной цитометрии

Введение: Пароксизмальная ночная гемоглобинурия (ПНГ) — редкое заболевание кроветворной стволовой клетки, обусловленное соматической мутацией гена PIGA, которая приводит к дефициту белков, связанных с клеточной мембраной посредством гликозилфосфатидилинозитольных (GPI) якорей. Проточная цитометрия является методом выбора для выявления клеток с дефицитом GPI-связанных белков и поэтому необходима для диагностики ПНГ, однако до настоящего времени не предпринималось попыток стандартизировать методику выявления таких клеток.

Методы: В настоящем документе представлен консенсусный подход к проведению проточной цитометрии для выявления клеток ПНГ.

Результаты: Обсуждаются клинические показания, приведены рекомендации по интерпретации и представлению результатов, однако основное внимание уделено важным для анализа аналитическим процедурам. Различаются стандартный анализ, при котором выявляется аномальная популяция численностью 1% и более, и высокочувствительный анализ, позволяющий обнаружить всего 0,01% клеток ПНГ. Подробно представлены панели антител и стратегии гейтирования, необходимые для обоих видов анализа. Обсуждаются методы оценки популяций ПНГ в лейкоцитах и эритроцитах, а также относительные преимущества каждого подхода. Описаны этапы валидации более сложных высокочувствительных методик, включая необходимость тщательного титрования реагентов и определения фоновых значений в нормальных популяциях; также рассмотрены технические факторы, способные повлиять на интерпретацию результатов.

Выводы: Этот документ позволит лабораториям, планирующим начать исследование ПНГ, внедрить валидированную методику, а лабораториям с большим опытом — усовершенствовать свои методы.