9-cis-ретиноевая кислота повышает способность ооцитов крупного рогатого скота к развитию и улучшает качество эмбрионов при созревании ооцитов in vitro за счёт подавления экспрессии гена фактора некроза опухоли α в ооцитах

Ретиноевая кислота (all-транс-ретиноевая кислота и 9-cis-ретиноевая кислота) повышает способность эмбрионов к развитию и улучшает их качество посредством различных механизмов, воздействующих на ооцит и эмбрион до имплантации. Фактор некроза опухоли α (ФНО-α) влияет на фолликулогенез и созревание ооцитов, подавляя активность ароматазы и секрецию эстрадиола в клетках гранулёзы. Ретиноевая кислота подавляет выработку ФНО-α в различных клеточных линиях. Цель настоящего исследования — определить, регулирует ли концентрация ФНО-α в ооцитах их способность к развитию и качество эмбрионов, а также обусловлено ли благоприятное действие 9-cis-ретиноевой кислоты снижением выработки ФНО-α в ооцитах. Комплексы кумулюс–ооцит крупного рогатого скота, полученные из яичников на бойне, созревали в среде для созревания без добавок (контроль) или с добавлением 5 нМ 9-cis-ретиноевой кислоты, 100 нг/мл рекомбинантного ФНО-α крупного рогатого скота либо 5 нМ 9-cis-ретиноевой кислоты и 100 нг/мл рекомбинантного ФНО-α. Затем ооциты собирали для анализа экспрессии генов или подвергали оплодотворению и культивированию in vitro. Апоптоз и экспрессию генов анализировали в бластоцистах на 8-е сутки. 9-cis-ретиноевая кислота снижала (P < 0,01) базальную и индуцированную ФНО-α экспрессию мРНК ФНО-α в ооцитах: относительный уровень составил 1,0 в контроле, 0,4 при добавлении 9-cis-ретиноевой кислоты, 2,1 при добавлении ФНО-α и 0,7 при совместном добавлении обоих веществ. По сравнению с контролем 9-cis-ретиноевая кислота повышала (P < 0,001) частоту развития до стадии бластоцисты (37,1 ± 6,9 против 23,6 ± 8,0%) и общее число клеток (138,4 ± 19,2 против 120,2 ± 24,5), а также снижала (P < 0,001) долю апоптотических клеток (3,3 ± 2,0 против 5,6 ± 2,3%). В бластоцистах, полученных после созревания с 9-cis-ретиноевой кислотой, экспрессия мРНК каспазы-3 (0,4 против 1,0) и ФНО-α (0,4 против 1,0) была ниже (P < 0,05), чем в контроле. Кроме того, 9-cis-ретиноевая кислота частично восстанавливала (P < 0,001) частоту развития до стадии бластоцисты (24,5 ± 11,1 против 15,6 ± 9,0%), повышала общее число клеток (124,6 ± 36,5 против 106,9 ± 31,1) и снижала апоптоз (5,8 ± 2,0 против 8,1 ± 3,1%) в бластоцистах после воздействия ФНО-α. В этих бластоцистах добавление 9-cis-ретиноевой кислоты снижало (P < 0,05) экспрессию мРНК каспазы-3 (0,8 против 2,2) и ФНО-α (0,3 против 2,8) по сравнению с группой, получавшей только ФНО-α. Результаты исследования позволяют предположить, что благоприятное действие 9-cis-ретиноевой кислоты на способность ооцитов к развитию и качество эмбрионов обусловлено снижением экспрессии мРНК ФНО-α в ооцитах.