Разработка аналитического метода выявления неправомерного применения болденона в спорте по анализу мочи методом онлайн-сопряжения жидкостной и газовой хроматографии с масс-спектрометрией изотопных отношений после сжигания

Болденон (Bo), андроста-1,4-диен-17β-ол-3-он, — анаболический андрогенный стероид, не одобренный для клинического применения у человека. Несмотря на это, ежегодно сообщается о многочисленных случаях выявления у спортсменов Bo или его основного метаболита 5β-андрост-1-ен-17β-ол-3-она (BoM). Недавно было показано, что различные бактерии кишечника человека способны вырабатывать ферменты, превращающие эндогенные стероиды в болденон. При концентрации Bo и/или BoM в моче от 5 до 30 нг/мл необходимо дополнительное исследование методом газовой хроматографии–масс-спектрометрии изотопных отношений после сжигания (GC-C-IRMS), позволяющее различить эндогенное и экзогенное происхождение этих соединений. В настоящей работе описан новый аналитический метод, основанный на сопряжении жидкостной и газовой хроматографии с масс-спектрометрией изотопных отношений после сжигания с использованием интерфейса TOTAD. Метод включает первоначальное разделение неацилированных стероидов методом обращённо-фазовой жидкостной хроматографии, последующее ацетилирование и автоматизированный онлайн-анализ методом LC-GC-C-IRMS. Он также предусматривает вторичную очистку ацетилированных Bo и BoM методом обращённо-фазовой жидкостной хроматографии, выделение обеих фракций в коллекторе фракций и их последовательный анализ методом GC-C-IRMS. Метод применили для анализа образцов мочи с добавлением аналитов в концентрациях 5 и 10 нг/мл; он продемонстрировал хорошие рабочие характеристики.