Улучшенная культуральная среда поддерживает развитие случайно выведенных одноклеточных мышиных эмбрионов in vitro

Одноклеточные эмбрионы CF-1 x B6SJLF1/J, которые обычно демонстрируют блок развития на стадии 2 клеток in vitro, культивировали до стадии бластоцисты с использованием среды CZB и процедуры отмывания от глюкозы. Среда CZB представляет собой дальнейшую модификацию BMOC-2 с повышенным соотношением лактат/пируват до 116, 1 мМ глутамина и 0,1 мМ ЭДТА, но без глюкозы. Непрерывное культивирование одноклеточных эмбрионов в среде CZB позволяло 83% эмбрионов проходить стадию 2 клеток; через 72 ч культивирования 63% из них находились на стадии морулы, но бластоцисты не образовывались. Однако перенос эмбрионов в среду CZB, содержащую глюкозу, после 48 ч культивирования (стадия 3-4 клеток) был достаточен для продолжения развития, и через 96 ч культивирования 48% эмбрионов достигали стадии бластоцисты. Воздействие глюкозы было необходимо только со стадии 3-4 клеток до ранней стадии морулы, поскольку обратный перенос в среду CZB без глюкозы через 72 ч культивирования также стимулировал развитие 50% эмбрионов до стадии бластоцисты. Наличие глюкозы в этой среде в первые 48 ч культивирования (стадии 1-4 клеток) было неблагоприятным для развития эмбрионов. Глутамин, напротив, оказывал благоприятное влияние на развитие эмбрионов со стадии 1 до стадии 4 клеток, хотя его присутствие не требовалось для продолжения развития в последние 48 ч культивирования. Бластоцисты, развившиеся в оптимальных условиях, содержали в среднем 33,7 клетки. Развитие одноклеточных эмбрионов in vitro за пределы стадии 2 клеток в ответ на удаление глюкозы и добавление глутамина в культуральную среду позволяет предположить, что глюкоза может блокировать некоторый жизненно важный метаболический процесс, а глутамин может быть предпочтительным энергетическим субстратом на ранних этапах развития этих мышиных эмбрионов.