Новый ингибитор ренин-ангиотензиновой системы 25-O-метилализол F ослабляет эпителиально-мезенхимальный переход и тубулоинтерстициальный фиброз за счёт избирательного подавления фосфорилирования Smad3, опосредованного TGF-β

Введение: Тубулоинтерстициальный фиброз (ТИФ) — общий путь прогрессирования хронической болезни почек (ХБП). Эпителиально-мезенхимальный переход (ЭМП) вносит существенный вклад в развитие ТИФ, увеличивая количество миофибробластов. Ренин-ангиотензиновая система (РАС) играет ключевую роль в развитии ЭМП при прогрессирующей ХБП. Ангиотензин II (ANG) стимулирует трансформирующий фактор роста β1 (TGF-β1), опосредуя ЭМП и вызывая ТИФ. Активация РАС может дополнительно усиливать активность TGF-β1. Подавление РАС — один из наиболее эффективных методов лечения прогрессирующей ХБП. 25-O-метилализол F (MAF) — новое тетрациклическое тритерпеновое соединение, выделенное из корневищ альпинии восточной (Alismatis rhizoma), которые широко применяются для снижения артериального давления, усиления диуреза и коррекции гиперлипидемии.

Методы: Влияние MAF на ЭМП изучали в клетках эпителия канальцев (NRK-52E) и фибробластах (NRK-49F), стимулированных TGF-β1 или ANG. Для оценки подавления ЭМП под действием MAF и изучения его влияния на пути РАС, TGF-β/Smad и Wnt/β-катенина применяли иммуноблоттинг, количественную ПЦР с обратной транскрипцией в реальном времени, малые интерферирующие РНК, иммунофлуоресцентное окрашивание и коиммунопреципитацию.

Результаты: В клетках NRK-52E и NRK-49F MAF значительно ослаблял изменения экспрессии коллагена I, фибронектина, α-SMA, виментина и E-кадгерина на уровне мРНК и белка, вызванные TGF-β1 и ANG. MAF существенно снижал экспрессию ангиотензиногена, ренина, АПФ и AT1R. Кроме того, в клетках NRK-52E MAF ослаблял повышение фосфорилирования Smad3 и снижение экспрессии Smad7, но не влиял на фосфорилирование Smad2, PI3K, ERK1/2 и p38 или на экспрессию Smad4. Коиммунопреципитация показала, что MAF избирательно препятствовал взаимодействию Smad3 с TGFβRI и SARA, не нарушая взаимодействия Smad2 с TGFβRI и SARA. Помимо этого, в клетках NRK-52E MAF подавлял экспрессию Wnt1 и β-катенина, а также их нижележащих мишеней Snail1, Twist, MMP-7, PAI-1 и FSP1.

Выводы: MAF одновременно воздействовал на несколько компонентов РАС и являлся новым ингибитором этой системы. MAF подавлял ЭМП через специфический для Smad3 сигнальный путь TGF-β/Smad и путь Wnt/β-катенина. В ходе ЭМП MAF существенно влиял на взаимодействие путей TGF-β/Smad и Wnt/β-катенина, связанное с активацией РАС.