Сравнение эффективности различных методов оплодотворения in vitro: ЭКО, ИКСИ и ПИКСИ при получении бластоцист из витрифицированных незрелых ооцитов свиней

Введение: В большинстве исследований восстановления и развития ооцитов свиней после витрификации лучшие показатели получены при криоконсервации на стадиях эмбрионального развития или на стадии зиготы, но не незрелых ооцитов. Поэтому во многих исследованиях совершенствуют протоколы витрификации незрелых ооцитов, проверяя различные концентрации криопротекторов, устройства для охлаждения и продолжительность инкубации. Однако лишь в немногих работах оценивали, какой способ оплодотворения повышает частоту образования бластоцист из витрифицированных ооцитов. Целью исследования было оценить: 1) может ли отбор сперматозоидов с помощью гиалуроновой кислоты (HA) или поливинилпирролидона (PVP) перед инъекцией повысить частоту оплодотворения и образования бластоцист; 2) способность к развитию эмбрионов и выход бластоцист при использовании незрелых ооцитов свиней после витрификации и оттаивания, которые созревали in vitro (IVM) в совместной культуре с клетками гранулёзы. Сравнивали три метода оплодотворения: оплодотворение in vitro (IVF), интрацитоплазматическую инъекцию сперматозоида (ICSI) и стандартную ICSI с отбором сперматозоидов по связыванию с гиалуроновой кислотой — физиологическую интрацитоплазматическую инъекцию сперматозоида (PICSI).

Результаты: При отборе сперматозоидов с помощью HA для PICSI доля живых сперматозоидов с акросомной реакцией была выше, чем в контрольной группе и после воздействия PVP. После воздействия PVP доля погибших сперматозоидов с акросомной реакцией была выше, чем в контрольной группе и после воздействия HA. Жизнеспособность витрифицированных ооцитов значительно снижалась после IVM. При этом частота созревания не различалась между контрольными денудированными ооцитами, культивируемыми с клетками гранулёзы (DO-GC), и витрифицированными ооцитами. При сравнении показателей оплодотворения частота общего оплодотворения была выше после IVF, чем после ICSI и PICSI. Однако частота образования бластоцист после PICSI была выше, чем после IVF и ICSI, как для контрольных DO-GC, так и для витрифицированных ооцитов.

Выводы: Для получения высокой частоты образования бластоцист из витрифицированных ооцитов на стадии герминативного пузырька перед инъекцией рекомендуется отбирать сперматозоиды с помощью HA, а не PVP, поскольку при таком отборе отмечены высокая жизнеспособность сперматозоидов и высокая частота акросомной реакции. PICSI также оказался наиболее эффективным методом получения бластоцист по сравнению с IVF и ICSI.