Характеристика и метаболический профиль метаболитов оксиметолона и местастерона, изученных с использованием модели S9 печени человека и GC-Orbitrap-HRMS в антидопинговых целях

Модели метаболизма in vitro позволяют обойти этические проблемы, связанные с исследованиями введения препаратов человеку, предварительно прогнозировать метаболизм у человека и получать высокие концентрации метаболитов для их характеристики. Оксиметолон и местастерон, относящиеся к классу S1.1 анаболических андрогенных стероидов в Запрещённом списке Всемирного антидопингового агентства (WADA), в последние годы стабильно входили в число 20 веществ, наиболее часто выявляемых при неблагоприятных аналитических результатах, что отражает сохраняющееся злоупотребление ими в спорте. Поскольку эти стероидные гормоны имеют экзогенное происхождение, их метаболиты относятся к объектам допинг-контроля, поэтому изучение метаболизма имеет ключевое значение для антидопинговых исследований. В настоящей работе фракции S9 печени человека использовали в качестве модели для характеристики и профилирования метаболитов оксиметолона и местастерона методом газовой хроматографии с масс-спектрометрией высокого разрешения на приборе Orbitrap (GC-Orbitrap-HRMS). Для выявления свободной и двух конъюгированных фракций метаболитов применяли режим полного сканирования GC-Orbitrap-HRMS; результаты сопоставляли с контрольными группами для подтверждения образования метаболитов при инкубации in vitro. Возможные структуры метаболитов определяли по масс-спектрам электронного удара, а также рассматривали метаболические пути обоих препаратов. В условиях in vitro были идентифицированы три метаболита оксиметолона и пять метаболитов местастерона. Два из них — OMT-M3 (2α,17α-метил-5ξ-андростан-3α,6β,17β-триол) и MTS-M3 (2α,17α-диметил-5ξ-андростан-3α,12ξ,16ξ,17β-тетрол) — на основании недавно полученных данных о метаболизме у человека in vivo были охарактеризованы как новые метаболиты. Эти метаболиты образуются по различным метаболическим путям, а их структуры подтверждены взаимодополняющими метаболическими исследованиями in vitro и in vivo. Исследование даёт всестороннюю оценку применимости модели фракций S9 печени человека для изучения метаболизма анаболических стероидов in vitro, подтверждает наличие новых метаболитов у человека и предоставляет важные сведения для дальнейших исследований в этой области.