Повторное исследование биотрансформации 17α-метилтестостерона in vivo у лошади: выявление 17-гидроксиметильных метаболитов в моче лошадей методом капиллярной газовой хроматографии/масс-спектрометрии

Биотрансформация 17α-метилтестостерона in vivo у лошади приводит к образованию сложной смеси регио- и стереоизомерных метаболитов C20O2, C20O3 и C20O4, выводимых с мочой в виде глюкуронидных и сульфатных конъюгатов II фазы. Основные пути метаболизма включают восстановление кольца A (образование ди- и тетрагидропроизводных), эпимеризацию в положении C-17 и окисление преимущественно в положениях C-6 и C-16. Некоторые метаболиты I фазы ранее были идентифицированы методом капиллярной газовой хроматографии/масс-спектрометрии с электронной ионизацией и регистрацией положительных ионов (GC/EI + MS), главным образом по характерным картинам фрагментации их метилоксим-триметилсилиловых (MO-TMS), енолог-триметилсилиловых или триметилсилиловых эфирных производных. После перорального введения 17α-метилтестостерона двум кастрированным жеребцам чистокровной верховой породы конъюгаты глюкуроновой кислоты, содержащиеся в образцах мочи, собранных после введения препарата, подвергали селективному гидролизу ферментами β-глюкуронидазы E. coli. Неконъюгированные метаболиты и стероидные агликоны, полученные после ферментативного деконъюгирования, выделяли из мочи методом твердофазной экстракции, дериватизировали в форме MO-TMS-эфиров и анализировали методом GC/EI + MS. Помимо некоторых ранее известных метаболитов, идентифицированных по характерным картинам масс-спектрометрической фрагментации 17α-метилстероидов, были обнаружены изобарные соединения, для которых характерны диагностическая потеря 103 единиц массы из молекулярных ионов с последующей потерей триметилсиланола или метоксильных групп, а также отсутствие классического фрагментного иона D-кольца. На основании интерпретации их масс-спектров эти соединения были идентифицированы как 17-гидроксиметильные метаболиты, образующиеся in vivo у лошади при окислении 17-метильной группы 17α-метилтестостерона. В исследовании методом GC/EI + MS идентифицированы новые 17-гидроксиметильные метаболиты 17α-метилтестостерона C20O3 и C20O4, выводимые с мочой чистокровных верховых лошадей.