Количественное определение метаболитов 17β-нандролона в моче хряков и лошадей методом газовой хроматографии с масс-спектрометрией

Оптимизирован и валидирован метод количественного определения метаболитов 17β-нандролона (17βN) в моче хряков и лошадей. Метаболиты, выделяемые в свободной форме, экстрагировали при pH 9,5 трет-бутилметиловым эфиром. Водные фазы наносили на картриджи Sep-Pak C18, после чего конъюгированные стероиды элюировали метанолом. После упаривания досуха к экстракту применяли либо ферментативный гидролиз β-глюкуронидазой из Escherichia coli, либо сольволиз смесью этилацетата, метанола и концентрированной серной кислоты. Затем деконъюгированные стероиды экстрагировали при щелочном pH трет-бутилметиловым эфиром. Высушенные органические экстракты дериватизировали смесью MSTFA:NH4I:2-меркаптоэтанола для получения триметилсилильных производных и анализировали методом газовой хроматографии с масс-спектрометрией (GC/MS). Метод валидировали в моче хряков и лошадей для следующих метаболитов в различных метаболических фракциях: норaндростерона, норэтиохоланолона, норэпиаандростерона, 5β-эстран-3α,17β-диола, 5α-эстран-3β,17β-диола, 5α-эстран-3β,17α-диола, 17α-нандролона, 17βN, 5(10)-эстрен-3α,17α-диола, 17α-эстрадиола и 17β-эстрадиола. Степень извлечения для всех анализируемых веществ в свободной фракции превышала 90%, а в глюкуронидной и сульфатной фракциях — 80%, за исключением 17α-эстрадиола в глюкуронидной фракции (74%), а также 5α-эстран-3β,17α-диола и 17βN в сульфатной фракции (около 70%). Пределы количественного определения составляли от 0,05 до 2,1 нг/мл в свободной фракции, от 0,3 до 1,7 нг/мл в глюкуронидной фракции и от 0,2 до 2,6 нг/мл в сульфатной фракции. Внутрисерийные и межсерийные показатели прецизионности, оценённые по относительному стандартному отклонению, и правильности, оценённой по относительной стандартной ошибке, для большинства анализируемых веществ были ниже 15%, а для остальных — ниже 25%. Метод применили для анализа образцов мочи, собранных после введения лаурата 17βN хрякам и лошадям; его пригодность для количественного определения метаболитов в трёх фракциях была продемонстрирована.