Новый автоматизированный метод измерения общей антиоксидантной реакции в отношении реакций с высокореакционноспособными свободными радикалами

Цель: Окислительное повреждение биомолекул возникает в результате интенсивных реакций с высокореакционноспособными свободными радикалами. В настоящем исследовании описан новый колориметрический полностью автоматизированный метод измерения общей антиоксидантной реакции (TAR) в отношении таких реакций.

Методы: Интенсивные реакции с высокореакционноспособными свободными радикалами инициировали образованием гидроксильного радикала (OH•) в реакции Фентона. Скорость реакций оценивали по изменению оптической плотности окрашенных дианизидильных радикалов. Орто-дианизидин (10 мМ) и сульфат железа(II)-аммония (45 мкМ) растворяли в растворе KCl/HCl (75 мМ, pH 1,8). Эту смесь обозначили как реагент 1, а раствор перекиси водорода (7,5 мМ) — как реагент 2. При смешивании реагентов 1 и 2 образовывался OH•, который окислял молекулы о-дианизидина до дианизидильных радикалов, вызывая в течение нескольких секунд появление яркой жёлто-коричневой окраски. Антиоксиданты, содержащиеся в образце, подавляли развитие окраски пропорционально своей концентрации. Метод внедрили в автоматический анализатор и определили его аналитические характеристики.

Результаты: Растворы витамина C, Trolox, восстановленного глутатиона, билирубина, мочевой кислоты и (+/−)-катехина подавляли развитие окраски в зависимости от их концентрации. Общая антиоксидантная реакция сыворотки в отношении интенсивных реакций со свободными радикалами была ниже у пациентов с хронической почечной недостаточностью (1,13 ± 0,21 ммоль эквивалента Trolox/л) и выше у новорождённых с желтухой (2,82 ± 1,18 ммоль эквивалента Trolox/л), чем у здоровых лиц (1,54 ± 0,15 ммоль эквивалента Trolox/л).

Выводы: Описанный простой, недорогой и полностью автоматизированный метод можно использовать для измерения общей антиоксидантной реакции образцов в отношении интенсивных реакций со свободными радикалами.