Выявление болденона и метилболденона в моче крупного рогатого скота с помощью одноразовых электрохимических иммуносенсоров

В статье описаны электрохимические иммуносенсоры для выявления болденона и метилболденона в моче крупного рогатого скота. Иммуносенсоры изготавливали путём иммобилизации конъюгата болденона с бычьим сывороточным альбумином на поверхности электродов с трафаретной печатью, после чего проводили конкурентную реакцию между свободным аналитическим веществом и нанесённым конъюгатом с соответствующими антителами. Степень конкуренции определяли с использованием конъюгата антивидовых IgG с пероксидазой хрена. В качестве электрохимического метода использовали хроноамперометрию при потенциале +100 мВ; при этом продукт каталитической реакции с участием 3,3′,5,5′-тетраметилбензидина восстанавливался под действием ферментной метки. Пределы обнаружения составляли соответственно 30,9 ± 4,3 пг/мл для болденона и 120,2 ± 8,2 пг/мл для метилболденона. Результаты повторного анализа каждого андрогена с использованием трёх различных партий электродов свидетельствовали о приемлемой воспроизводимости: для болденона EC50 составила 1,0 ± 0,3 нг/мл (n = 3, N = 3), R² = 0,969, относительное стандартное отклонение — 9,6%; для метилболденона — соответственно 1,5 ± 0,3 нг/мл, 0,971 и 10,5%. Образцы мочи исследовали непосредственно после однократного разведения, без экстракции и гидролиза. Благодаря высокой перекрёстной реактивности антител с α-болденоном этот метод позволяет эффективно выявлять как болденон, так и его основные метаболиты. Обнаружение метилболденона в моче с помощью разработанных методов свидетельствовало о его введении тёлкам. Для количественного определения отдельных метаболитов в образцах мочи проводили газовую хроматографию в сочетании с масс-спектрометрией; полученные результаты подтверждали данными иммуноферментного анализа и иммуносенсоров.