Идентификация и подтверждение наличия анаболического стероида болденона в крови и моче лошадей методом ВЭЖХ/ИФА

Разработан иммуноферментный анализ (ИФА) для выявления анаболического стероида болденона в крови и моче лошадей. Поликлональную антисыворотку получали у кроликов, используя в качестве антигена конъюгат болденона-17-гемисукцината с бычьим сывороточным альбумином. В качестве ферментного конъюгата применяли болденон-17-гемисукцинат, соединённый с пероксидазой хрена. Чувствительность метода составила 26,0 ± 3,0 пг/лунку. Среди исследованных эндогенных стероидов умеренная перекрёстная реактивность выявлена только для прогестерона и тестостерона — 3,4 и 2,5% соответственно. Эти перекрёстные реакции не имеют существенного значения для определения болденона. Для снижения фоновых значений болденон в сыворотке лошадей выявляли после экстракции. Образцы мочи исследовали непосредственно после разведения, без гидролиза конъюгатов болденона. Положительные результаты скрининга подтверждали с помощью двух независимых систем ВЭЖХ с последующим внепоточным детектированием методом ИФА на болденон. Для определения коэффициентов удерживания использовали метандиенон в качестве внутреннего стандарта. У лошадей, получавших болденона-17-ундециленат, наличие болденона подтверждалось в сыворотке в течение 28 дней, а в негидролизованной моче — в течение 56 дней после введения.