Секреторная экспрессия наттокиназы из Bacillus subtilis YF38 в Escherichia coli

Бактерию, продуцирующую наттокиназу, B. subtilis YF38 выделили из доуцзи методом фибриновой пластинки. Ген, кодирующий этот фермент, клонировали методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Цитоплазматическая экспрессия фермента в E. coli приводила к образованию неактивных телец включения. Однако с использованием двух разных сигнальных пептидов — нативного сигнального пептида наттокиназы и сигнального пептида PelB — в E. coli удалось успешно экспрессировать активную наттокиназу с её секрецией в периплазматическое пространство; наттокиназа в культуральной жидкости обладала высокой фибринолитической активностью. При индукции рекомбинантного штамма 0,7 ммоль/л изопропил-β-D-тиогалактопиранозидом (IPTG) при 20 °C в течение 20 ч фибринолитическая активность экспрессированного фермента в культуре достигала 260 единиц урокиназы на микролитр, а выход активного фермента составлял 49,3 мг на литр культуры. Свойства рекомбинантной наттокиназы были сопоставимы со свойствами нативной наттокиназы B. subtilis YF38. Секреторная экспрессия наттокиназы в E. coli может способствовать разработке этого фермента в качестве лекарственного средства для контроля и профилактики тромботических заболеваний.