Применение технологий in vitro для изучения метаболизма андрогенно-анаболического стероида станозолола у лошадей

В этом исследовании микросомы печени и лёгких лошади, а также тканевые фракции S9 использовали для изучения метаболизма андрогенно-анаболического стероида станозолола как примера возможностей технологий in vitro при контроле применения препаратов в конном спорте. Инкубаты in vitro анализировали качественно одновременно с образцами мочи, полученными после введения станозолола in vivo, методом LC–MS на высокоразрешающем масс-спектрометре Thermo Orbitrap Discovery с точным определением массы, методом LC–MS/MS на приборе Applied Biosystems Sciex 5500 Q Trap и методом GC–MS/MS на приборе Agilent 7000A. При полнодиапазонном сканировании с точным определением массы на приборе Orbitrap фракции микросом печени и S9 лошади in vitro образовывали все основные метаболиты I фазы, выявленные после введения препарата in vivo. Кроме того, анализ инкубатов микросом печени с использованием более пологого градиента ВЭЖХ в сочетании с различными режимами MS/MS на приборе 5500 Q Trap позволил идентифицировать ряд метаболитов I фазы, ранее не описанных ни у лошадей, ни у других видов. Сравнение метаболизма во фракциях S9 печени и лёгких показало, что печень является основным органом метаболизма у лошадей. Кроме того, применение химических ингибиторов ферментов, избирательных к определённым изоформам у других видов, позволило предположить, что в образовании метаболитов 16-гидроксистанозолола у лошадей может участвовать фермент, родственный CYP2C8. В целом результаты изучения метаболизма I фазы in vitro и in vivo хорошо согласуются и демонстрируют потенциал исследований in vitro для дополнения существующей парадигмы исследований in vivo, а также для защиты животных за счёт сокращения числа экспериментов и совершенствования их методики.