Функциональные свойства мутаций RYR1, выявленных у пациентов из Швеции со злокачественной гипертермией и болезнью центрального стержня

Введение: Диагностику предрасположенности к злокачественной гипертермии с помощью теста на сокращение in vitro зачастую можно проводить только в специализированных лабораториях, расположенных далеко от места жительства пациентов. Поэтому мы разработали протокол генетического скрининга кДНК RYR1 и функционального тестирования новых вариантов гена рецептора рианодина 1 (RYR1) в В-лимфоцитах, выделенных из образцов периферической крови, взятых в местных учреждениях первичной медико-санитарной помощи.

Методы: В-лимфоциты выделяли для экстракции мРНК RYR1 и геномной ДНК, а также для получения лимфобластоидных линий В-клеток у 5 пациентов с ещё не классифицированными мутациями RYR1. В лимфобластоидных линиях В-клеток исследовали концентрацию кальция в цитоплазме в состоянии покоя, пиковое повышение концентрации кальция под действием тапсигаргина — ингибитора Ca-АТФазы сарко(эндо)плазматического ретикулума, — а также дозозависимое высвобождение кальция под действием агониста рецептора рианодина 4-хлор-м-крезола.

Результаты: Из всех образцов удалось экстрагировать мРНК для синтеза кДНК и получить клоны В-лимфоцитов. Во всех лимфобластоидных линиях В-клеток с предполагаемыми мутациями RYR1 выявляли достоверно более высокую концентрацию кальция в цитоплазме в состоянии покоя, а также сдвиг в сторону более низких концентраций 4-хлор-м-крезола, вызывающих высвобождение кальция, по сравнению с контролем.

Выводы: Образцы периферической крови сохраняют пригодность для экстракции РНК и ДНК и получения лимфобластоидных линий В-клеток после транспортировки обычной почтой на большие расстояния при комнатной температуре. Результаты функционального тестирования В-клеток, несущих вновь выявленные замены аминокислот, указывают на нарушение ими внутриклеточного гомеостаза Ca2+ и позволяют предположить, что именно эти варианты являются причиной злокачественной гипертермии.