Определение сульфатных, глюкуронидных и свободных форм α- и β-болденона, а также андростадиендиона в моче крупного рогатого скота с очисткой на иммуноаффинных колонках и методом жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией

Вопрос о происхождении болденона в моче крупного рогатого скота остаётся предметом дискуссий в Европе на протяжении двух десятилетий. Несмотря на запрет его применения в качестве стимулятора роста в Европейском союзе с 1981 года, обнаружение α-болденона в конъюгированной форме в моче крупного рогатого скота считается полностью соответствующим требованиям при концентрации до 2 нг/мл. Конъюгированная форма β-болденона не должна обнаруживаться. В последние годы исследования болденона были сосредоточены на выявлении биомаркеров, указывающих на незаконное введение препарата. Сульфат β-болденона рассматривается как один из возможных биомаркеров, хотя все доступные в настоящее время исследования проводились на небольших выборках. В настоящем исследовании разработан и валидирован метод определения сульфатных и глюкуронидных конъюгатов β-болденона в соответствии с Решением Европейской комиссии 2002/657/EC; кроме того, метод применён для определения сульфатной и глюкуронидной форм α-болденона, свободных форм α- и β-болденона, а также андростадиендиона (ADD). Очистка на иммуноаффинных колонках обеспечила прямое определение конъюгатов и свободных форм и позволила проводить специфичный и чувствительный анализ случайно отобранных образцов мочи для проверки метода. Пределы принятия решения (CCα) составляли от 0,07 до 0,08 нг/мл, а способности обнаружения (CCβ) — от 0,08 до 0,1 нг/мл. Извлечение для всех исследуемых веществ превышало 92%. Повторяемость внутри дня составляла от 5,8 до 17,2%, а междневная повторяемость — от 6,0 до 21,8% для изученных свободных и конъюгированных форм. Разработанный метод может служить эффективным инструментом для изучения происхождения болденона в исследовании с участием значительного числа животных.