Обнаружение болденона, его конъюгатов и андростадиендиона, а также пяти кортикостероидов в желчи крупного рогатого скота с использованием уникальной очистки на иммуноаффинной колонке и двух валидированных методов жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией

Наличие метаболитов II фазы β-болденона и преднизолона в образцах мочи, обусловленное эндогенным или естественным происхождением либо незаконным применением препаратов, остаётся предметом дискуссии в Европейском союзе. До настоящего времени обнаружение конъюгатов β-болденона, конъюгатов α-болденона в концентрации выше 2 нг/мл и преднизолона в концентрации выше порогового уровня 5 нг/мл в моче имело решающее значение для установления факта незаконного применения препаратов. Использование мочи не всегда даёт удовлетворительные результаты, особенно при введении низких доз препарата или его очень быстрой метаболической трансформации, что может затруднять обнаружение препарата в моче. Введение новой, более информативной матрицы для выявления незаконного лечения представляло бы значительный интерес. В настоящем исследовании разработана и валидирована простая оригинальная процедура очистки с использованием иммуноаффинной колонки, которую применяли к образцам желчи крупного рогатого скота с последующим анализом двумя различными методами жидкостной хроматографии с электроспрей-ионизацией и тандемной масс-спектрометрией. Первый метод предназначен для определения андростадиендиона, сульфатов и глюкуронатов α- и β-болденона, а также соответствующих свободных форм; второй — для определения преднизолона, преднизона, дексаметазона, кортизона и кортизола. Методы валидировали в соответствии с Решением Европейской комиссии 2002/657/ЕС. Оценивали линейность, специфичность, прецизионность (повторяемость и внутрилабораторную воспроизводимость), извлечение, предел принятия решения и способность к обнаружению. Пределы принятия решения (CCα) для анаболических стероидов составляли 0,38–0,45 нг/мл, а для кортикостероидов — 0,13–0,15 нг/мл. Повторяемость внутри- и междневных измерений для всех аналитов не превышала соответственно 15,8 и 19,9%. Методы применили для анализа ряда образцов желчи, полученных от молодых бычков, не подвергавшихся лечению, чтобы исследовать наличие изучаемых стероидов в этой матрице.