Дополнение к характеристике образующихся in vivo N-глюкуронидов станозолола с помощью расчета и анализа сечения столкновения

Подробная информация о структуре метаболитов, используемых в качестве целевых аналитов в программах клинического, судебно-медицинского и спортивного допинг-контроля, крайне важна для получения однозначных результатов исследований. В настоящем исследовании оценивали, насколько анализ сечения столкновения (CCS) по данным измерения подвижности ионов в бегущей волне может помочь в характеристике метаболитов лекарственных средств, на примере недавно выявленных конъюгатов станозолола — анаболического андрогенного стероида — с глюкуроновой кислотой. С помощью спектрометрии подвижности ионов в бегущей волне в сочетании с квадрупольным времяпролетным масс-спектрометром измерили времена дрейфа пяти синтетических, полностью охарактеризованных глюкуронидов стероидов, а затем сопоставили их с соответствующими значениями CCS, полученными расчетным методом, чтобы построить калибровочную кривую для конкретных аналитов. Значения CCS рассчитывали после оптимизации равновесной геометрии методом теории функционала плотности в программе ORCA с использованием функционала и базисного набора B3LYP/6-31G, а также в программе MOBCAL траекторным методом (TM), приняв азот в качестве газа дрейфа. В тех же экспериментальных условиях анализировали синтезированные и/или выделенные из мочи N- и O-глюкурониды станозолола, чтобы получить дополнительную информацию о положении глюкуронирования. Полученные данные сравнили со значениями CCS, рассчитанными встроенным алгоритмом системы на основе калибровки смесью полиаланиновых аналитов. Рассчитанные значения CCS (ΩN₂) для пяти калибровочных глюкуронидов стероидов составляли 180–208 Ų, охватывая большую часть наблюдавшихся и рассчитанных значений CCS для N1′-, N2′- и O-глюкуронидов станозолола — 195,1–212,4 Ų. Полученные данные подтвердили ранее предполагавшееся N- и O-глюкуронирование станозолола и показали применимость измерения подвижности ионов и расчета CCS для характеристики структуры продуктов метаболизма II фазы. Однако, хотя различия в подвижности ионов N1′-, N2′- и O-глюкуронидов станозолола воспроизводимо измерялись, разрешающей способности выбранного алгоритма расчета CCS оказалось недостаточно для точного различения двух N-конъюгатов. При калибровке по полиаланину для всех значений CCS получили существенно отличавшиеся абсолютные величины, однако постоянное смещение примерно на 45 Ų обеспечивало отличную корреляцию между двумя подходами (R² = 0,9997). Это позволяет значительно ускорить анализ: для установления структуры можно использовать закономерности, выявляемые при сопоставлении расчетных данных и экспериментальных данных, полученных с калибровкой по полиаланину, вместо построения индивидуальных калибровочных кривых для каждого аналита.