Данггуй Шаояо Сан защищает от вызванной циклофосфамидом преждевременной недостаточности яичников, подавляя апоптоз и окислительный стресс через регуляцию сигнального пути SIRT1/p53

Этнофармакологическая значимость: Известно, что апоптоз и окислительный стресс связаны с преждевременной недостаточностью яичников (ПНЯ), вызванной циклофосфамидом (ЦФ). Поэтому методы лечения, направленные на подавление апоптоза и окислительного стресса, эффективны при такой ПНЯ. Данггуй Шаояо Сан (DSS), широко применяемый для лечения гинекологических заболеваний, подавляет апоптоз и уменьшает окислительный стресс. Однако роль DSS в регуляции апоптоза и окислительного стресса при вызванной ЦФ ПНЯ и связанные с этим механизмы до сих пор не изучены.

Цель: Изучить роль и механизмы действия DSS при подавлении апоптоза и окислительного стресса при ПНЯ, вызванной ЦФ.

Материалы и методы: Для исследования in vivo модель ПНЯ создавали у мышей посредством внутрибрюшинного введения ЦФ в дозе 75 мг/кг. Для оценки защитного действия DSS на яичники отслеживали изменения массы тела, морфологии яичников и эстрального цикла. Концентрации ЛГ и E2 в сыворотке крови определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА). Для изучения патологических изменений в яичниках и подсчёта фолликулов на разных стадиях применяли окрашивание гематоксилином и эозином. Апоптоз оценивали с помощью окрашивания TUNEL и определения уровня связанных с апоптозом белков. Окислительный стресс оценивали по уровням активных форм кислорода (АФК), малонового диальдегида (MDA) и 4-гидроксиноненаля (4-HNE). Белки, связанные с сигнальным путем SIRT1/p53, определяли методом иммуноблоттинга.

В экспериментах in vitro использовали клетки KGN. Для создания клеточной модели апоптоза, индуцированного окислительным стрессом, клетки стимулировали TBHP. Защитное действие DSS при окислительном повреждении, вызванном TBHP, оценивали с помощью МТТ-теста. Антиапоптотическое действие DSS оценивали окрашиванием Hoechst/PI и JC-1, а также по уровням связанных с апоптозом белков. Антиоксидантное действие DSS оценивали по уровням АФК, MDA и 4-HNE. Белки, связанные с сигнальным путем SIRT1/p53, также исследовали методом иммуноблоттинга и иммунофлуоресцентного окрашивания. Кроме того, для дальнейшего изучения роли SIRT1 в защитном действии DSS против апоптоза и окислительного стресса подавляли SIRT1 с помощью EX527.

Результаты: В эксперименте in vivo DSS дозозависимо подавлял апоптоз и окислительный стресс и оказывал защитное действие на яичники. Лечение DSS также снижало выраженность апоптоза, уровни связанных с ним белков и показатели окислительного стресса, повышало экспрессию SIRT1 и снижало экспрессию p53. В эксперименте in vitro DSS защищал клетки KGN от окислительного повреждения, вызванного TBHP. Кроме того, применение DSS снижало долю апоптотических клеток, уровни связанных с апоптозом белков и выраженность повреждения митохондриального мембранного потенциала и окислительного стресса. Подавление SIRT1 с помощью EX527 устраняло антиапоптотическое и антиоксидантное действие DSS, а также его защитное действие на яичники в экспериментах in vivo и in vitro.

Выводы: У мышей с ПНЯ DSS подавляет апоптоз и окислительный стресс и защищает яичники; в клетках KGN он также подавляет апоптоз и окислительный стресс. Это действие связано с активацией SIRT1 и подавлением сигнального пути p53.