Криоконсервация ткани яичника у собак методом медленного замораживания и витрификации: оценка морфологии фолликулов и частоты апоптоза

Цель: оценить эффективность криоконсервации ткани яичника у собак методами витрификации и медленного замораживания, а также выявить возможные различия криотолерантности в зависимости от типа фолликула и метода криоконсервации. В исследование включили 28 яичников, полученных от 14 сук в анаэструсе различных пород в возрасте 2–5 лет, которым выполняли плановую овариогистерэктомию. Яичники разделяли на мелкие фрагменты и случайным образом распределяли в три группы: витрификация, медленное замораживание и контрольную группу (свежая ткань). Витрификацию выполняли в криотрубках с раствором DAP 213 (2 M ДМСО, 1 M ацетамид, 3 M пропиленгликоль) в два этапа, а медленное замораживание — в криотрубках с 1,5 M раствором ДМСО в программируемом аппарате. Эффекты криоконсервации оценивали гистологически и методом иммуногистохимии (расщеплённая каспаза-3) для определения доли клеток, подвергающихся апоптозу. При гистологическом исследовании в группе медленного замораживания доля интактных фолликулов была значимо выше, чем при витрификации (45,75 % против 38,17 %; P = 0,01). Иммуногистохимическая оценка также показала, что 84,21 % фолликулов в группе медленного замораживания не экспрессировали каспазу-3, что указывало на отсутствие апоптоза. Напротив, в витрифицированных образцах число апоптотических клеток было значимо выше, чем в других группах (P < 0,001). Кроме того, ранние антральные фолликулы были более чувствительны к дегенерации независимо от использованного метода криоконсервации. При сравнении криоконсервированных групп ранние антральные фолликулы сильнее дегенерировали в группе медленного замораживания, тогда как преантральные фолликулы больше всего страдали при витрификации. В целом медленное замораживание обеспечивало лучшее сохранение жизнеспособных фолликулов по сравнению с витрификацией и оказалось предпочтительным методом криоконсервации ткани яичника у собак. Эти данные дают важные ориентиры для оптимизации методов криоконсервации ткани яичника у собак и могут быть полезны для репродуктивных технологий и сохранения фертильности у этих животных.