Влияние плазмы пациентов с активной тиреоид-ассоциированной орбитопатией на выживаемость и воспаление фибробластов, ассоциированных с меланомой

Введение: Плазма пациентов с активной тиреоид-ассоциированной орбитопатией (TAO-A) может вызывать воспаление фибробластов; этот механизм изучали в контексте меланомы.

Методы: Образцы плазмы пациентов с TAO-A и здоровых добровольцев сначала совместно культивировали с фибробластами, ассоциированными с меланомой (MAFs), полученными от пациентов с меланомой. После определения уровня провоспалительных цитокинов оценивали выживаемость и воспалительный статус MAFs. Экспрессию маркеров Ki67 и виментин (VIM) анализировали методом иммунофлуоресценции, а выживаемость и миграцию клеток оценивали с помощью набора для подсчёта клеток CCK-8 и теста Transwell. Клетки THP-1 индуцировали к дифференцировке в макрофаги, которые затем совместно культивировали для оценки поляризации по типу M1/M2. Уровни воспалительных факторов определяли методом иммуноферментного анализа (ELISA). Экспрессию генов измеряли методом количественной ПЦР с обратной транскрипцией (RT-qPCR), а активацию сигнальных путей PI3K/AKT, STAT1, p65 и ERK оценивали методом вестерн-блоттинга.

Результаты: В плазме пациентов с TAO-A были повышены уровни провоспалительных цитокинов. Такая плазма усиливала воспалительный статус и выживаемость MAFs, повышала уровни PI3K и AKT и снижала экспрессию Bax. Совместное культивирование MAFs с плазмой заметно усиливало поляризацию макрофагов по типу M1 и фосфорилирование STAT1, p65 и ERK1/2.

Выводы: Полученные данные подтверждают влияние плазмы пациентов с TAO-A на выживаемость и воспаление MAFs и создают основу для дальнейшего изучения соответствующих механизмов.