Сочетание биспецифического Т-клеточного энхансера CD3/GD2 с Т-клетками человека Vγ9Vδ2 способствует распознаванию и уничтожению клеток нейробластомы in vitro

Иммунотерапия рака, особенно терапия на основе Т-клеток, обладает значительным потенциалом для лечения различных злокачественных новообразований. Одним из перспективных подходов считают применение γδ-Т-клеток. Нейробластома — солидная опухоль, часто встречающаяся в детском возрасте, — представляет собой одну из наиболее интересных мишеней для иммунотерапии. В этом исследовании представлен альтернативный метод иммунотерапии нейробластомы, основанный на сочетании биспецифического антитела с Т-клетками человека Vγ9Vδ2. Сначала методом фагового паннинга проводили отбор человеческих одноцепочечных вариабельных фрагментов антитела (scFv) к CD3ε. В непрямом ИФА человеческий scFv CD3, клон 18, продемонстрировал наибольшую способность связываться с CD3ε. Поэтому человеческий scFv CD3, клон 18, был выбран для создания биспецифического Т-клеточного энхансера, направленного одновременно против CD3 и дисиалоганглиозида GD2, получившего название CD3/GD2 BiTE. Это биспецифическое антитело состояло из человеческого scFv CD3, клона 18 (VH–VL), и мышиного scFv GD2 (VL–VH), соединённых гибким пептидным линкером. На N- и C-концы соответственно добавили сигнальную последовательность интерлейкина-2 и полигистидиновую метку для секреции и очистки белка. CD3/GD2 BiTE временно продуцировали в системе экспрессии на основе клеток млекопитающих, что обеспечивало высокий выход и качество белка. CD3/GD2 BiTE самопроизвольно формировал компактную мономерную структуру. В исследованиях связывания на клетках было показано, что CD3/GD2 BiTE специфически связывается с соответствующими антигенами на CD3-положительных клетках Jurkat и GD2-положительных клетках SH-SY5Y, но не взаимодействует с CD3-отрицательными клетками Raji и GD2-отрицательными клетками SK-N-SH. В последующих экспериментах in vitro оценивали цитотоксичность CD3/GD2 BiTE в сочетании с Т-клетками человека Vγ9Vδ2 в отношении клеток нейробластомы. Перед добавлением к клеткам SH-SY5Y Т-клетки человека Vγ9Vδ2 предварительно активировали CD3/GD2 BiTE, чтобы повысить специфичность и авидность их связывания с клеточными линиями нейробластомы. При концентрациях 180 и 360 нМ CD3/GD2 BiTE значительно усиливал способность Т-клеток человека Vγ9Vδ2 уничтожать клетки SH-SY5Y при соотношении эффекторных клеток и клеток-мишеней 1:1. Кроме того, Т-клетки человека Vγ9Vδ2, снабжённые CD3/GD2 BiTE, обеспечивали уничтожение клеток нейробластомы при использовании в 5–10 раз меньшего числа эффекторных клеток. Сочетание CD3/GD2 BiTE с Т-клетками человека Vγ9Vδ2 также проявляло цитотоксическую активность в отношении трёхмерной модели опухолевого сфероида SH-SY5Y GFP при соотношении эффекторных клеток и клеток-мишеней 1:1. Таким образом, CD3/GD2 BiTE усиливает способность Т-клеток человека Vγ9Vδ2 направленно распознавать и уничтожать клетки нейробластомы в двумерных и трёхмерных культурах. Эти результаты позволяют предположить, что сочетание CD3/GD2 BiTE с Т-клетками человека Vγ9Vδ2 в будущем может стать альтернативной стратегией иммунотерапии пациентов с нейробластомой.