Преимплантационное генетическое тестирование на анеуплоидии выявляет триплоидные эмбрионы среди ооцитов с нормальным оплодотворением: частота и особенности бластоцист

Введение: С широким внедрением культивирования до стадии бластоцисты и развитием технологий генетического тестирования, позволяющих надежно определять плоидность, традиционное представление о нормальном оплодотворении пересматривается. Хотя наличие двух пронуклеусов (2PN) обычно считают признаком нормального оплодотворения, не все эмбрионы, происходящие из 2PN, являются эуплоидными. Среди биоптатов трофэктодермы (TE), анализируемых методом секвенирования нового поколения (NGS) в рамках преимплантационного генетического тестирования на анеуплоидии (PGT-A), часть оказывается триплоидной.

Цель: Определить, позволяют ли определенные морфологические и морфокинетические признаки отличить триплоидные бластоцисты, происходящие из 2PN, от эуплоидных бластоцист, происходящих из 2PN.

Методы: Ретроспективное исследование, включавшее 3369 циклов у 2666 пациенток 18–45 лет, которым в нашем центре ЭКО в 2019–2023 годах выполняли PGT-A с NGS и генотипированием по однонуклеотидным полиморфизмам (SNP) биоптатов трофэктодермы. Среди 12 395 проанализированных бластоцист 59 были классифицированы как триплоидные; они были получены в 57 циклах PGT-A и принадлежали 54 пациенткам. Оценку оплодотворения пересматривали повторно. Триплоидные эмбрионы анализировали с учетом извержения второго полярного тельца, дня биопсии (5-й или 6-й день), качества трофэктодермы и внутренней клеточной массы (ВКМ), а также морфокинетических параметров (времени деления от 2- до 5-клеточной стадии). Категориальные переменные представляли в виде долей. Для непрерывных переменных использовали t-критерий Стьюдента; значение P < 0,05 считали статистически значимым.

Результаты: Генетический анализ выявил 50 триплоидных бластоцист, произошедших из зигот 2PN. Были выделены две подгруппы триплоидных бластоцист: 2PN с двумя полярными тельцами (PB) и 2PN с одним PB. По сравнению с эуплоидными эмбрионами-сиблингами триплоидные эмбрионы характеризовались: а) значимым диморфизмом пронуклеусов, когда один пронуклеус был существенно крупнее другого; б) замедленными морфокинетическими параметрами, с более медленным дроблением уже с первого деления (t2: 28,59 ± 3,74 ч против 25,70 ± 2,90 ч; t3: 39,76 ± 3,48 ч против 36,75 ± 3,03 ч; t4: 40,75 ± 4,07 ч против 37,25 ± 3,66 ч; t5: 54,85 ± 8,07 ч против 46,34 ± 5,54 ч соответственно; P < 0,05); в) сниженным качеством эмбрионов, с меньшей долей бластоцист высокого качества по трофэктодерме.

Выводы: Полученные данные прежде всего подчеркивают необходимость повышенного внимания к риску триплоидии у эмбрионов, происходящих из внешне нормального оплодотворения (2PN). Морфологические и морфокинетические параметры, хотя и связаны с триплоидией, не обладают достаточной точностью, чтобы заменить прямую генетическую оценку плоидности, которая остается единственным надежным методом исключения триплоидии. Большинство триплоидных эмбрионов, происходящих из 2PN, по-видимому, связано с задержкой второго полярного тельца, что подчеркивает важность точной проверки оплодотворения, особенно с учетом экскреции второго PB. Это особенно важно в циклах без PGT-A или при использовании платформ, не позволяющих определять плоидность, поскольку триплоидия — наиболее частая форма анеуплоидии, выявляемая при выкидышах в первом триместре. Частота триплоидии среди зигот 2PN может различаться в зависимости от условий работы эмбриологической лаборатории. Учитывая небольшое число выявленных триплоидных эмбрионов, эти данные следует интерпретировать с осторожностью.