Активация гена ангиотензиногена ангиотензином II опосредована транскрипционным фактором RelA (p65 ядерного фактора κB): один из механизмов положительной обратной связи ренин-ангиотензиновой системы в гепатоцитах

Ренин-ангиотензиновая система регулирует артериальное давление посредством ферментативного образования вазопрессорного ангиотензина II (AII) из предшественника — ангиотензиногена (AGT). Внутрисосудистое образование AII стимулирует синтез его предшественника de novo по механизму положительной обратной связи за счёт усиления экспрессии гена. В настоящем исследовании изучено влияние AII на экспрессию гена AGT. В наномолярных концентрациях AII активирует транскрипцию эндогенного гена AGT; этот эффект обусловлен участком мультгормон-индуцируемого энхансера гена AGT (−615—−470). В пределах мультгормон-индуцируемого энхансера сайт-направленные мутации элемента ответа острой фазы (APRE), препятствующие связыванию транскрипционного фактора ядерного фактора κB (NF-κB), также устраняют ответ на AII. APRE функционирует как быстро индуцируемый AII-зависимый энхансер: максимальная активность репортёрного гена выявляется через 4 ч стимуляции; этот эффект наблюдается только при экспрессии рецептора AII 1-го типа. AII индуцирует в ядерных экстрактах клеток HepG2 специфичное связывание NF-κB с APRE. Кроме того, воздействие AII на первичные культуры гепатоцитов крыс вызывает быстрое, четырёхкратное усиление специфичного связывания NF-κB с APRE. Антитела к субъединице транскрипционного активатора RelA количественно вызывают сверхсдвиг нуклеопротеинового комплекса, тогда как антитела к другим субъединицам NF-κB такого эффекта не оказывают; это доказывает, что связывающаяся с APRE активность RelA индуцируется AII. Временная сверхэкспрессия RelA(1–551) активирует мультгормон-индуцируемый энхансер AGT. Домены RelA, отвечающие за индукцию AII, картировали путём совместной трансфекции химерного белка GAL4–RelA и репортёрного гена, содержащего сайты связывания GAL4. GAL4–RelA(1–551) представлял собой AII-индуцируемый активатор транскрипции. Удаление 254 аминокислот с N-конца RelA приводит к образованию конститутивно активного трансактиватора, что указывает на активацию RelA ангиотензином II посредством механизма, зависящего от его N-концевого участка. Эти результаты определяют один из механизмов положительной обратной связи ренин-ангиотензиновой системы в гепатоцитах.