Новые потенциальные маркеры выявления злоупотребления болденоном

Болденон относится к числу наиболее часто выявляемых анаболических андрогенных стероидов при допинг-контроле. Обычно злоупотребление болденоном выявляют методом газовой хроматографии — масс-спектрометрии (GC-MS) после предварительного гидролиза β-глюкуронидазами, экстракции и дериватизации: идентифицируют действующее вещество и его основной метаболит 5β-андрост-1-ен-17β-ол-3-он (BM1). Однако описаны случаи эндогенного происхождения болденона и BM1. В настоящее время при выявлении этих соединений в моче в низких концентрациях для подтверждения их экзогенного происхождения требуется анализ методом масс-спектрометрии изотопных отношений (IRMS). Цель настоящего исследования — выявить конъюгированные с сульфатом метаболиты болденона и оценить их потенциальную пригодность для улучшения выявления злоупотребления болденоном в спорте. Здоровому добровольцу ввели болденон; образцы мочи собирали в течение 56 ч после введения. После жидкость-жидкостной экстракции этилацетатом экстракты мочи анализировали методом тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией (LC-MS/MS) с электроспрей-ионизацией в отрицательном режиме, отслеживая переход m/z 365–350, специфичный для сульфата болденона. В образцах мочи, собранных в ходе исследования выведения, был идентифицирован сульфат болденона; кроме того, наблюдался ещё один пик с тем же переходом. На основании характеристик MS/MS метаболит был идентифицирован как сульфат эпиболденона. Его идентичность подтверждена выделением пика LC, сольволизом и сравнением времени удерживания и спектров MS/MS со стандартом эпиболденона. Ранее эти сульфатированные метаболиты у человека не описывались. Несмотря на то что на их долю приходилось менее 1% введённой дозы, они сохранялись в моче, когда концентрации основных метаболитов — болденона и BM1 — уже соответствовали уровню эндогенного происхождения. Сульфатированные метаболиты также выявили в 10 образцах мочи, признанных положительными на болденон и BM1 методом GC-MS. Для оценки пригодности этих новых метаболитов к дифференциации эндогенного и экзогенного происхождения болденона исследовали 4 образца с эндогенным болденоном и BM1, подтверждённым методом IRMS. В 3 из 4 образцов ни сульфат болденона, ни сульфат эпиболденона не обнаружили, что подтверждает преимущественное выявление этих метаболитов после экзогенного введения болденона. Напротив, сульфат болденона, а в некоторых случаях и сульфат эпиболденона, присутствовал в образцах с низкими концентрациями экзогенного болденона и BM1. Таким образом, сульфаты болденона и эпиболденона являются дополнительными маркерами экзогенного происхождения болденона и могут использоваться для сокращения числа образцов, требующих анализа методом IRMS. В образцах с концентрациями болденона и BM1, подозрительными на эндогенное происхождение, дальнейший анализ методом IRMS для подтверждения экзогенного происхождения потребуется только при наличии сульфатов болденона и эпиболденона.