Приготовление богатой тромбоцитами плазмы для регенеративной медицины: оптимизация и количественное определение цитокинов и факторов роста

Введение: Богатая тромбоцитами плазма (БТП) сегодня широко применяется в различных клинических ситуациях, таких как ортопедия, офтальмология и терапия ран, в качестве источника факторов роста для улучшения регенерации тканей. Однако исследования ее клинической эффективности не дают однозначных результатов, и одна из основных причин этого заключается в том, что используются разные методы приготовления БТП, вызывающие разные реакции и не поддающиеся сравнению. Чтобы понять молекулярные механизмы регенеративного действия БТП, необходимо определить количество тромбоцитов и содержание факторов роста. Поэтому стандартизация препаратов БТП крайне необходима.

Методы: БТП готовили методом центрифугирования с варьированием относительной центробежной силы, температуры и времени. После оценки восстановления и выхода тромбоцитов выбрали двухэтапную процедуру, обеспечивавшую наибольший выход, и далее проанализировали ее подробнее. Содержание цитокинов определяли в различных фракциях, полученных на всех этапах центрифугирования.

Результаты: Предложенный метод был воспроизводимым при применении к крови разных доноров. Было восстановлено от 46,9 до 69,5% исходного количества тромбоцитов, а в результате процедуры их концентрация увеличивалась в 5,4–7,3 раза и составляла от 1,4 × 10(6) до 1,9 × 10(6) тромбоцитов/мкл. Тромбоциты были высокоочищенными, поскольку в конечном препарате БТП сохранялось менее 0,3% исходного количества эритроцитов и лейкоцитов. Также было количественно определено содержание факторов роста, цитокинов и хемокинов, секретируемых концентрированными тромбоцитами после активации кальцием и кальцием/тромбином. Выделялись высокие концентрации тромбоцитарного фактора роста, эндотелиального фактора роста и трансформирующего фактора роста (TGF), а также противовоспалительных и провоспалительных цитокинов интерлейкина (IL)-4, IL-8, IL-13, IL-17, фактора некроза опухоли (TNF)-α и интерферона (IFN)-α. До активации тромбоцитов цитокины не секретировались. TGF-β3 и IFNγ не были обнаружены ни в одной из исследованных фракций. Сгустки, полученные после коагуляции тромбоцитов, сохраняли высокую концентрацию ряда факторов роста, включая тромбоцитарный фактор роста и TGF.

Выводы: В исследовании был разработан воспроизводимый метод приготовления БТП, обеспечивающий у разных доноров пул цитокинов и факторов роста с высокой степенью воспроизводимости. Эти данные подтверждают целесообразность применения БТП в терапии, направленной на регенерацию тканей, а характеристика ее состава позволит понять и улучшить клинические исходы.