Расширение аналитических возможностей выявления злоупотребления станозололом с помощью высокоразрешающей масс-спектрометрии с высокой точностью определения массы глюкуронидов станозолола при допинг-контроле

Анаболические андрогенные стероиды (ААС) относятся к наиболее часто выявляемым классам запрещённых веществ при допинг-контроле. Поскольку положительное влияние этих препаратов на спортивные результаты сохраняется длительное время, желательно обеспечить максимально длительное ретроспективное выявление их применения при анализе мочи; для этого исследуют долгоживущие метаболиты соответствующих препаратов. В случае станозолола значительное разнообразие метаболитов уже позволяло выявлять многочисленные неблагоприятные аналитические результаты, а недавние исследования дополнительных метаболитов I и II фаз ещё больше расширили возможности выявления злоупотребления станозололом. В настоящем исследовании показана применимость жидкостной хроматографии в сочетании с высокоразрешающей масс-спектрометрией с высокой точностью определения массы (LC-MS/MS) для выявления глюкуронида 3′-гидроксистанозолола при допинг-контроле, а также идентифицированы два дополнительных, ранее не описанных метаболита. Структуры дополнительных конъюгатов с глюкуроновой кислотой были отнесены к N-глюкурониду станозолола и N-глюкурониду 17-эпистанозолола. Для подтверждения предполагаемых структур методом химического синтеза был получен N-глюкуронид станозолола. Глюкуронид 3′-гидроксистанозолола и новые целевые соединения были включены в рутинные анализы допинг-контроля, предусматривающие прямое введение образца в систему LC-MS/MS либо твёрдофазную экстракцию с последующим анализом методом LC-MS/MS. По сравнению с использованием обычных метаболитов I фазы и методик, основанных, например, на низкоразрешающей LC-MS/MS или газовой хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией (GC-MS/MS), было продемонстрировано существенное расширение окна выявления злоупотребления станозололом. Коммерческая доступность глюкуронида 3′-гидроксистанозолола оказалась весьма полезной для подтверждающих исследований, а N-глюкуронид 17-эпистанозолола был признан перспективным долгоживущим метаболитом для допинг-контроля, поскольку его выявляли до 28 суток после введения препарата. Применение разработанной методики в течение шести месяцев при исследовании 659 образцов, полученных в рамках рутинного допинг-контроля, позволило выявить 85 неблагоприятных аналитических результатов, 72 из которых остались бы невыявленными при использовании ранее применявшихся подходов на основе GC-MS/MS.